化工儀器網
詳細介紹
本網站銷售的化學產品僅供科學研究或工業應用，不直接用于食品、藥品、臨床或動物的診斷或治療！
細胞屬性：
方法簡介
公司實驗室分離的小鼠精原干采用先機械吹打、后消化，結合Percoll密度梯度離心法制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。
質量檢測
公司實驗室分離的小鼠精原干經CD44免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。
產品名稱 | 小鼠精原干原代細胞 | 組織來源 | 睪丸組織 |
英文名稱 | Mouse Spermatogonial Stem Cells | 貨號 | YS-01X7493 |
產品規格 | 5×10?Cells/T25培養瓶 | 用途 | 僅供科研實驗 |
細胞簡介：
小鼠精原干細胞分離自睪丸組織；精原干細胞是位于睪丸生精小管的生精上皮內的一群生精干細胞，是成體內的定向干細胞。精原干細胞的一些優勢使其成為動物轉基因的理想宿主細胞。精原干細胞的生理生化特性及其分裂增殖、分化等多項生命活動的調節機制的深入研究，發生機理的進一步闡明以及精原干細胞轉染，異體、異種移植技術的實際應用，都迫切需要找到一種可行的方法將其分離純化，以期得到較高產量和純度的有活力的精原細胞用于體外培養。在哺乳動睪丸內，發生時一個受高度調控和持續的過程，精原干細胞（SSCs）一方面進行自我更新維持干細胞數量，另一方面又不斷執行分化成各級生精細胞直至后生成。精原干細胞定居在曲精細管上皮的基膜處，是哺乳動物發生的原始細胞，也是動物體內一起能將遺傳信息傳遞的干細胞。精原干細胞體外培養體系的建立，在生物學、醫學、畜牧業生產及制備轉基因動物等領域具有廣闊的應用前景。精原干細胞（SSCs）是生精上皮近基底膜的一群細胞，具有自我更新能力和多向分化潛能，是哺乳動物體內能將遺傳信息傳遞給下一代的成體干細胞。
培養信息：
培養基 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率 每2-3天換液一次
生長特性 懸浮
細胞形態 球形
傳代特性 可傳2-3代左右
消化液 0.25%
培養條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%
細胞培養方法：
1、細胞傳代：細胞密度達到80-90%時即可傳代
①棄去培養上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；
②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆蓋整個瓶或皿，蓋好放入培養箱消化；
③1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，若大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入培養基終止消化；若細胞還是貼壁，放回培養箱繼續消化至可以輕輕吹打下為止；
④將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；
⑤用新鮮培養基重懸后加入培養瓶或皿中，T25培養瓶加6-8ml培養基；
⑥懸浮細胞直接離心收集，細胞沉淀重懸后分到新培養瓶中。
2、細胞復蘇：
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時間1min左右，加入4-5ml培養基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養基吹勻，將細胞懸液加入培養瓶中，補加適量培養基。
3、細胞凍存：待細胞生長狀態良好時進行細胞凍存保種
①棄去培養上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）
②1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入培養基終止消化；
③將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細胞；
④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時后將凍存管轉入液氮罐儲存。
操作步驟：
1.將無菌的蓋玻片置于細胞培養皿中，將細胞懸液接種于培養皿中進行細胞爬片，待細胞長至80%時取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次，4%的多聚甲醛固定爬片15min，再次用PBS浸洗玻片3次，每次3min。
3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室溫孵育爬片20min，使細胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內源性過氧化物酶，室溫孵育15min（一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫），PBS沖洗3次，每次3min。
5. 封閉血清室溫孵育20min，PBS沖洗3次，每次3min。
6. 細胞特異性一抗孵育：按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗，滴加在爬片上，于4°C濕盒中孵育一夜，PBS沖洗3次，每次3min。
7. 二抗孵育：選與一抗對應的二抗，按比例稀釋后滴加在爬片上，37°C濕盒中孵育30min，PBS沖洗3次，每次3min。
8. 將爬片周圍水漬吸干，爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液，顯微鏡下觀察，當出現棕黃色或棕褐色的陽性信號時用蒸餾水沖洗終止顯色。
9. 復染：用Harris蘇木素復染30s~1min，水洗后用1%的鹽酸酒精分化，再用蒸餾水（或PBS）水洗返藍。
10. 封片：將中性樹膠滴在爬片一側，再用蓋玻片蓋上，先放平蓋玻片一側再輕輕放下另一側，以免產生氣泡，封好的爬片平放置于通風廚中晾干。
11. 鏡檢觀察。
公司產品：
敘利亞倉鼠細胞系;Syrian Hamster AV12 胃癌細胞，MFC細胞 EPC細胞，大黃魚EPC細胞 | 過氧化物酶酰基A氧化酶2抗體 |
S100鈣結合蛋白A7抗體 | 細胞角蛋白42 |
裂解酶抗體 | 蛋白酸酶γ1抗體 |
肽W抗體 | 葡萄糖轉運蛋白10抗體 |
鋅指蛋白ZBTB12抗體 | 激活素受體2A抗體 |
SV40T轉化的人胚腎細胞(亞系);293T/17 | 肝實質細胞Many types of cells包裝：5 × 105次方(1ml) |
MOLT-4細胞，人急性T淋巴母細胞白血病細胞 大鼠卵巢癌細胞株,NUTU-19細胞 人外根殼細胞cDNAHHORSC cDNA | NCTC 1469(小鼠正常肝細胞) 5×106cells/瓶×2 |
軟骨細胞培養基CM | HFSF(人胚胎眼鞏膜成纖維細胞) 5×106cells/瓶×2 |
小鼠誘導性多潛能干細胞;PUMC-mips-A4 | CL-0239U-937(人組織細胞淋巴瘤細胞)5×106cells/瓶×2 |
C-33A細胞，人子細胞 兔主動脈平滑肌細胞,CCC-SMC-1細胞 人表皮角質細胞-胎兒HEK-f | 小鼠精原干原代細胞蛋白酸酶γ1抗體 |
骨骼肌細胞生長添加物SkMCGS | IMR-32人母細胞瘤細胞 IMR-32 human neuroblastoma cells MEM培養基(GIBCO)+10%FBS |
ALCAM Others Mouse 小鼠 ALCAM / CD166 人細胞裂解液 (陽性對照) | IL23 Protein Marmoset 重組絨猴 IL-23 (IL23A & IL12B Heterodimer) 蛋白 |
CM-M115小鼠小梁網細胞培養基100mL | 羧肽酶CPN2抗體 |
富含半蛋白2抗體 | 人食道上皮細胞總RNAHEEpiC NA |
有絲分裂控制樣蛋白DIS3L抗體 | 半乳糖凝集素8抗體 |
跨膜和泛素樣結構域蛋白1抗體 | SV40T轉化的人胚腎細胞(亞系);293T/17 |
化工儀器網