小鼠關(guān)節(jié)囊成纖維原代細胞公司出售的產(chǎn)品：小鼠原代腹膜間皮細胞 LS 180(人結(jié)腸腺癌細胞) HBL-100 人整合SV40基因的上皮細胞 1ml/T75 Mv 1 lu 貂肺上皮細胞 JM 人急性T淋巴細胞白血病細胞 人原代小膠質(zhì)細胞

小鼠關(guān)節(jié)囊成纖維原代細胞

小鼠關(guān)節(jié)囊成纖維細胞分離自關(guān)節(jié)囊組織；關(guān)節(jié)囊（articular capsule）是由結(jié)締組織構(gòu)成的膜囊，附著于關(guān)節(jié)的周圍，密封關(guān)節(jié)腔。關(guān)節(jié)囊的壁共有兩層：外層為纖維層；內(nèi)層為滑膜層。纖維層實際上是一個連結(jié)骨的骨膜向另一骨骨膜的移行。纖維層厚而堅韌，由致密結(jié)締組織構(gòu)成，含有豐富的血管和。其淺層纖維多呈縱行排列；深層纖維主要為環(huán)行纖維。纖維層的厚薄，各個關(guān)節(jié)不相同，即是在同一關(guān)節(jié)中，各部也不一致一般在運動范圍小的或是負重較大的關(guān)節(jié)中，都較厚而緊張，相反，于運動靈活的關(guān)節(jié)，則較薄而松弛。有的關(guān)節(jié)囊的部分纖維囊缺如，僅一層滑膜層；有的部分明顯增厚，形成韌帶。滑膜層薄而柔潤，是由疏松結(jié)締組織構(gòu)成，襯在纖維層內(nèi)面，周緣附著在關(guān)節(jié)軟骨的邊緣。它朝向關(guān)節(jié)腔的內(nèi)面光而發(fā)亮，此面上蓋有一層內(nèi)皮細胞。滑膜向關(guān)節(jié)腔分泌滑液，滑液是稍粘稠而透明的液體，可減少關(guān)節(jié)中相連骨的摩擦，是一種滑潤劑。滑膜表面可形成絨毛或皺襞突入關(guān)節(jié)腔內(nèi)。有時滑膜層可以穿過纖維層呈囊狀向外膨出，形成滑膜囊，常位于肌腱與骨面之間。有時滑膜層突出不明顯，僅呈深窩狀，稱為囊狀隱窩。成纖維細胞（Fibroblast）是疏松結(jié)締組織的主要細胞成分，由胚胎時期的間充質(zhì)細胞分化而來；成纖維細胞較大，輪廓清楚，多為突起的紡錘形或星形的扁平狀結(jié)構(gòu)，其細胞核呈規(guī)則的卵圓形，核仁大而明顯。成纖維細胞功能活動旺盛，細胞質(zhì)嗜弱堿性，具明顯的蛋白質(zhì)合成和分泌活動，在一定條件下，它可以實現(xiàn)跟纖維細胞的互相轉(zhuǎn)化；成纖維細胞對不同程度的細胞變性、壞死和組織缺損的修復(fù)有著十分重要的作用。剛分離的成纖維細胞呈圓形、折光性良好，懸浮于培養(yǎng)基中。30min細胞貼壁，其中部分開始伸出偽足，表現(xiàn)為小的突起；6h后細胞基本貼壁，伸展成梭形，胞核清晰，分布較均勻，散在生長，不聚集成團；細胞生長迅速，5-7天即呈融合狀態(tài)，細胞排列緊密，有的交叉重疊生長，平坦、胞體較大，細胞質(zhì)透明，細胞核較大，呈橢圓形，顏色淡。細胞融合，并彼此連接成網(wǎng)狀；細胞呈突起的紡錘形或星形的扁平分布。

產(chǎn)品名稱：小鼠關(guān)節(jié)囊成纖維細胞

組織來源：關(guān)節(jié)囊

產(chǎn)品規(guī)格：5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶

培養(yǎng)基：基礎(chǔ)培養(yǎng)基，含FBS、bFGF、Insulin、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率：每2-3天換液一次

生長特性：貼壁

細胞形態(tài)：成纖維細胞樣

傳代特性：可傳1-2代左右

消化液：0.25%

培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；CO2，5%

小鼠關(guān)節(jié)囊成纖維細胞體外培養(yǎng)周期有限；建議使用配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng)，以此保證該細胞的佳培養(yǎng)狀態(tài)：

方法簡介

實驗室分離的小鼠關(guān)節(jié)囊成纖維采用混合酶消化結(jié)合差速貼壁法制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。

質(zhì)量檢測

實驗室分離的小鼠關(guān)節(jié)囊成纖維經(jīng)Vimentin免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。

1、細胞傳代：細胞密度達到80-90%時即可傳代

①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；

②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆蓋整個瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；

③1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，若大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；若細胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；

④將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；

⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；

⑥懸浮細胞直接離心收集，細胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。

2、細胞復(fù)蘇：

①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。

②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補加適量培養(yǎng)基。

3、細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時進行細胞凍存保種

①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）

②1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；

③將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細胞；

④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲存。

 

1）復(fù)蘇細胞：將含有 1mL 細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘，棄去上清液，補 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜（或?qū)?細胞懸液加入 10cm 皿中，加入約 8ml 培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并 檢查細胞密度。

2）細胞傳代：如果細胞密度達 80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。

1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細胞 1-2 次。

2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分 變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化。

3. 按 6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘，棄去上清液，補加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。

4. 將細胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

3）細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。下面 T25 瓶為類；

1. 細胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml ，細胞變圓 脫 落后，加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計數(shù)板計數(shù)。