化工儀器網
詳細介紹
本網站銷售的化學產品僅供科學研究或工業應用，不直接用于食品、藥品、臨床或動物的診斷或治療！
細胞屬性：
方法簡介
公司實驗室分離的小鼠肝枯否采用混合酶灌流消化、低速離心、密度梯度離心、差速貼壁法制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。
質量檢測
公司實驗室分離的小鼠肝枯否經CD68免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。
產品名稱 | 小鼠肝枯否原代細胞 | 組織來源 | 肝臟組織 |
英文名稱 | Mouse Kupffer Cells | 貨號 | YS-01X7419 |
產品規格 | 5×10?Cells/T25培養瓶 | 用途 | 僅供科研實驗 |
細胞簡介：
小鼠枯否細胞分離自肝臟組織；肝臟是身體內以代謝功能為主的一個器官，并在身體里面起著去氧化、儲存肝糖、分泌性蛋白質的合成等作用；肝臟也制造消化系統中之膽汁。肝臟是機體內臟里大的器官，位于機體中的腹部位置，在右側橫隔膜之下，位于膽囊之前端且于右邊腎臟的前方，胃的上方。肝臟是機體消化系統中大的消化腺，為一紅棕色的V字形器官。肝臟是尿素合成的主要器官，又是新陳代謝的重要器官。肝臟在機體位置和形態結構：肝臟位于右上腹，隱藏在右側膈下和肋骨深面，大部分肝為肋弓所復蓋，僅在腹上區、右肋弓間露出并直接接觸腹前壁，肝上面則與膈及腹前壁相接。枯否氏細胞(Kupffer細胞)是肝臟的肝血竇內一些固定于竇壁的巨噬細胞，它能吞噬和清除大部分從腸道來的抗原微粒，并能吞噬和清除肝血竇中的細菌、異物和衰老的紅細胞，并把血紅蛋白分解成。此外，肝巨噬細胞也有處理抗原，誘導T細胞增殖，參與免疫調節的作用。枯否氏細胞和一般巨噬細胞不同，枯否氏細胞不具有增加抗原免疫原性的能力，相反有消除或減弱抗原性的作用。枯否氏細胞能吞噬來自血液循環的抗原抗體復合物和其他有害物質，以消除這些物質對機體的損害。枯否細胞功能障礙可導致腸源性內毒素血癥。電鏡下有很多皺褶和微絨毛。
培養信息：
培養基 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率 每2-3天換液一次
生長特性 貼壁
細胞形態 梭形、巨噬細胞
傳代特性 屬于終末分化細胞；屬于不增殖細胞群
消化液 （12mM）
培養條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%
細胞培養方法：
1、細胞傳代：細胞密度達到80-90%時即可傳代
①棄去培養上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；
②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆蓋整個瓶或皿，蓋好放入培養箱消化；
③1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，若大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入培養基終止消化；若細胞還是貼壁，放回培養箱繼續消化至可以輕輕吹打下為止；
④將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；
⑤用新鮮培養基重懸后加入培養瓶或皿中，T25培養瓶加6-8ml培養基；
⑥懸浮細胞直接離心收集，細胞沉淀重懸后分到新培養瓶中。
2、細胞復蘇：
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時間1min左右，加入4-5ml培養基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養基吹勻，將細胞懸液加入培養瓶中，補加適量培養基。
3、細胞凍存：待細胞生長狀態良好時進行細胞凍存保種
①棄去培養上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）
②1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入培養基終止消化；
③將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細胞；
④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時后將凍存管轉入液氮罐儲存。
公司產品：
水牛皮膚成纖維樣細胞;WB-S2 | 整合素β3抗體 |
過氧化物酶體增殖物激活受體γ輔激活子1β抗體 | 碳酸酶11抗體 |
纖連蛋白7抗體 | E3連接酶MMS21蛋白抗體 |
8號染色體開放閱讀框55抗體 | 抑癌基因抗體 |
1號染色體開放閱讀框177抗體 | 羥基酰谷甘肽水解酶樣蛋白抗體 |
TF Others Mouse 小鼠 ansferrin / CD176 / Seroansferrin 人細胞裂解液 (陽性對照) | Sars結構蛋白表達株;293 001B 人腎系膜細胞培養基 100mL |
人表皮黑色素細胞-深色素RNAHEM-d miRNA5 μg | 小鼠腦膜細胞(MMC)(5×105) |
PRSS8 Others Human 人 Prostasin / Prss8 人細胞裂解液 (陽性對照) | NBL1 Others Mouse 小鼠 NBL1 / DAND1 / DAN 人細胞裂解液 (陽性對照) |
SERPINA10 Others Mouse 小鼠 SERPINA10 / SerpinA10 / ZPI 人細胞裂解液 (陽性對照) | HPF Pellet 人肺成纖維細胞團塊 > 1 mio.cells 人海馬趾細胞裂解物HN-h L |
CM-M086小鼠真皮成纖維細胞培養基100mL | 小鼠肝枯否原代細胞E3連接酶MMS21蛋白抗體 |
REG3D Others Mouse 小鼠 REG3D 人細胞裂解液 (陽性對照) | MS751 人子宮頸表皮癌細胞 |
QBC-939, 人膽管癌細胞 Human | 水牛皮膚成纖維樣細胞;WB-S1 卵巢癌細胞，H08910細胞 K-562(慢性髓原白血病細胞) |
人角膜上皮細胞 (HcorF)( 5×105 ) | 活化白細胞粘附分子抗體 |
低密度脂蛋白受體相關蛋白1抗體 | 人細胞;Hela 人晶狀體上皮細胞培養基 100mL |
促凋亡Bik蛋白抗體 | 核小體組裝蛋白1抗體 |
細胞周期蛋白G相關激酶抗體 | TF Others Mouse 小鼠 ansferrin / CD176 / Seroansferrin 人細胞裂解液 (陽性對照) |
操作步驟：
1.將無菌的蓋玻片置于細胞培養皿中，將細胞懸液接種于培養皿中進行細胞爬片，待細胞長至80%時取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次，4%的多聚甲醛固定爬片15min，再次用PBS浸洗玻片3次，每次3min。
3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室溫孵育爬片20min，使細胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內源性過氧化物酶，室溫孵育15min（一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫），PBS沖洗3次，每次3min。
5. 封閉血清室溫孵育20min，PBS沖洗3次，每次3min。
6. 細胞特異性一抗孵育：按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗，滴加在爬片上，于4°C濕盒中孵育一夜，PBS沖洗3次，每次3min。
7. 二抗孵育：選與一抗對應的二抗，按比例稀釋后滴加在爬片上，37°C濕盒中孵育30min，PBS沖洗3次，每次3min。
8. 將爬片周圍水漬吸干，爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液，顯微鏡下觀察，當出現棕黃色或棕褐色的陽性信號時用蒸餾水沖洗終止顯色。
9. 復染：用Harris蘇木素復染30s~1min，水洗后用1%的鹽酸酒精分化，再用蒸餾水（或PBS）水洗返藍。
10. 封片：將中性樹膠滴在爬片一側，再用蓋玻片蓋上，先放平蓋玻片一側再輕輕放下另一側，以免產生氣泡，封好的爬片平放置于通風廚中晾干。
11. 鏡檢觀察。
化工儀器網