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詳細介紹
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細胞屬性：
方法簡介
實驗室分離的兔淋巴管內皮采用蛋白酶消化法結合內皮細胞專用培養基培養篩選制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。
質量檢測
實驗室分離的兔淋巴管內皮經VEGFR3免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。
產品名稱 | 兔淋巴管內皮原代細胞 | 組織來源 | 淋巴管 |
英文名稱 | Rabbit Lymphatic Endothelial Cells | 貨號 | YS-01X8157 |
產品規格 | 5×10?Cells/T25培養瓶 | 用途 | 僅供科研實驗 |
細胞簡介：
兔淋巴管內皮細胞分離自淋巴管組織；淋巴管由毛細淋巴管匯合而成。其形態結構與靜脈相似，但管徑較細，管壁較薄，瓣膜較多且發達，外形呈串珠狀。淋巴管根據其位置分為淺、深二種。它們管位于皮下，常與淺靜脈伴行，收集皮膚和皮下組織的淋巴。深淋巴管與深部血管伴行，收集肌肉和內臟的淋巴。淺、深淋巴管之間有廣泛的交通支。淋巴管在向心行程中，通常經過一個或多個淋巴結，從而把淋巴細胞帶入淋巴液。主要功能是濾過淋巴液，產生淋巴細胞和漿細胞，參與機體的免疫反應。當局部感染時，細菌、病毒或癌細胞等可沿淋巴管侵入，引起局部淋巴結腫大。如該淋巴結不能阻止和消滅它們，則病變可沿淋巴管的流注方向擴散和轉移。淋巴管內皮細胞（LEC）是襯覆于淋巴管內表面的一種單層扁平上皮，是構成淋巴管壁的主要結構，參與維持體液平衡，調節淋巴細胞再循環和機體的免疫反應和組織液及蛋白質的運輸，在疾病過程中也起著重要作用。近年研究表明，LEC還在傷口愈合、淋巴管水腫和炎癥擴散等病理過程中起重要作用，而且與腫瘤轉移密切相關。淋巴管內皮細胞主要功能：①調節體液、蛋白和組織壓力平衡；②為免疫系統的重要組成部分。淋巴管內皮細胞與主要病生理變化：①囊腫型淋巴管瘤；②淋巴管炎；③淋巴結核。
培養信息：
包被條件：PLL（0.1mg/ml），明膠（0.1%）
培養基：含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率：每2-3天換液一次
生長特性：貼壁
細胞形態：內皮細胞樣
傳代特性：可傳1-2代
消化液：0.25%
培養條件：氣相：空氣，95%；CO2，5%
兔淋巴管內皮細胞體外培養周期有限；建議使用配套的專用生長培養基及正確的操作方法來培養，以此保證該細胞的佳培養狀態。
細胞培養方法：
1、細胞傳代：細胞密度達到80-90%時即可傳代
①棄去培養上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；
②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆蓋整個瓶或皿，蓋好放入培養箱消化；
③1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，若大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入培養基終止消化；若細胞還是貼壁，放回培養箱繼續消化至可以輕輕吹打下為止；
④將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；
⑤用新鮮培養基重懸后加入培養瓶或皿中，T25培養瓶加6-8ml培養基；
⑥懸浮細胞直接離心收集，細胞沉淀重懸后分到新培養瓶中。
2、細胞復蘇：
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時間1min左右，加入4-5ml培養基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養基吹勻，將細胞懸液加入培養瓶中，補加適量培養基。
3、細胞凍存：待細胞生長狀態良好時進行細胞凍存保種
①棄去培養上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）
②1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入培養基終止消化；
③將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細胞；
④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時后將凍存管轉入液氮罐儲存。
公司產品：
人非小細胞肺腺癌細胞;NCI-H1975 大鼠視網膜微血管內皮細胞培養基 100mL | 酸化鐵調節蛋白1抗體 |
酸化鈣調酸酶B亞基B1抗體 | 轉錄因子RPF1抗體 |
腫瘤排斥抗原gp96 1 變異體抗體 | 酸化泌乳素抗體 |
軸突生長誘向因子4抗體 | 酸化鐵調節蛋白1抗體 |
酸化泌乳素抗體 | 轉錄因子RPF1抗體 |
b16 小鼠黑色素瘤細胞 | tTA基因修飾的小鼠畸胎瘤細胞(B類);P19-CAG-tTA-3C8 |
小鼠誘導性多潛能干細胞;PUMC-mips-A5 酶(含100mL 酶解緩沖液) 10mL | 細胞名稱 種屬 |
129小鼠胚胎干細胞 The 129 mouse embryonic stem cells | SW 780(人膀胱移行細胞癌) 5×106cells/瓶×2 |
CL-0155ME-180(人子宮頸表皮癌細胞)5×106cells/瓶×2 | CL-0143Lncap clone FGC(人前列腺癌細胞)5×106cells/瓶×2 |
U-2 OS細胞，人骨肉瘤細胞 黃綠青霉 人正常細胞;Hs 578Bst | 兔淋巴管內皮原代細胞酸化泌乳素抗體 |
非洲綠猴腎細胞系/HCV-NS4A;Vero-HCV-NS4A | P388D1細胞，小鼠淋巴樣瘤細胞 艱難梭菌Closidium difficile 非洲綠猴腎細胞;BS-C-1 |
EB病毒轉化的人B淋巴細胞;KMY0904 表皮角化細胞培養基 100mL | 牛陀螺狀細胞;BT |
NCI-H157 人非小細胞肺腺癌細胞 | 酸化造血祖細胞激酶抗體 |
軸突生長誘向因子4抗體 | 人少突膠質前體細胞總RNAHOPC NA |
酸化鈣調酸酶B亞基B1抗體 | 腫瘤排斥抗原gp96 1 變異體抗體 |
酸化造血祖細胞激酶抗體 | b16 小鼠黑色素瘤細胞 |
操作步驟：
1.將無菌的蓋玻片置于細胞培養皿中，將細胞懸液接種于培養皿中進行細胞爬片，待細胞長至80%時取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次，4%的多聚甲醛固定爬片15min，再次用PBS浸洗玻片3次，每次3min。
3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室溫孵育爬片20min，使細胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內源性過氧化物酶，室溫孵育15min（一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫），PBS沖洗3次，每次3min。
5. 封閉血清室溫孵育20min，PBS沖洗3次，每次3min。
6. 細胞特異性一抗孵育：按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗，滴加在爬片上，于4°C濕盒中孵育一夜，PBS沖洗3次，每次3min。
7. 二抗孵育：選與一抗對應的二抗，按比例稀釋后滴加在爬片上，37°C濕盒中孵育30min，PBS沖洗3次，每次3min。
8. 將爬片周圍水漬吸干，爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液，顯微鏡下觀察，當出現棕黃色或棕褐色的陽性信號時用蒸餾水沖洗終止顯色。
9. 復染：用Harris蘇木素復染30s~1min，水洗后用1%的鹽酸酒精分化，再用蒸餾水（或PBS）水洗返藍。
10. 封片：將中性樹膠滴在爬片一側，再用蓋玻片蓋上，先放平蓋玻片一側再輕輕放下另一側，以免產生氣泡，封好的爬片平放置于通風廚中晾干。
11. 鏡檢觀察。
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