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詳細(xì)介紹
本網(wǎng)站銷售的化學(xué)產(chǎn)品僅供科學(xué)研究或工業(yè)應(yīng)用，不直接用于食品、藥品、臨床或動物的診斷或治療！
細(xì)胞屬性：
方法簡介
實驗室分離的兔結(jié)腸黏膜上皮采用先機械分離法、后膠原酶消化法并通過上皮細(xì)胞專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。
質(zhì)量檢測
實驗室分離的兔結(jié)腸黏膜上皮經(jīng)Cytokeratin-18免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。
產(chǎn)品名稱 | 兔結(jié)腸黏膜上皮原代細(xì)胞 | 組織來源 | 結(jié)腸 |
英文名稱 | Rabbit Colonic Mucosal Epithelial Cells | 貨號 | YS-01X8376 |
產(chǎn)品規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | 用途 | 僅供科研實驗 |
細(xì)胞簡介：
兔結(jié)腸黏膜上皮細(xì)胞分離自結(jié)腸組織；結(jié)腸在右髂窩內(nèi)續(xù)于盲腸，在第3骶椎平面連接直腸。結(jié)腸分升結(jié)腸、橫結(jié)腸、降結(jié)腸和乙狀結(jié)腸4部分，大部分固定于腹后壁，結(jié)腸的排列酷似英文字母“M"，將小腸包圍在內(nèi)。結(jié)腸橫切面由內(nèi)到外依次為：黏膜（上皮層、固有層、黏膜肌層），黏膜下層（疏松結(jié)締組織），肌層（內(nèi)環(huán)形、外縱行兩層平滑肌），外膜（纖維膜或漿膜）。腸黏膜上皮細(xì)胞是機體內(nèi)外環(huán)境的重要屏障，持續(xù)暴露于大量抗原中，也是機體面對病原微生物的第一道防線。因此，腸黏膜上皮細(xì)胞除有吸收、分泌和轉(zhuǎn)運等重要生理功能之外，在黏膜先天性和獲得性免疫防御機制中也起著重要作用。腸黏膜上皮細(xì)胞作為首先接觸抗原的細(xì)胞，在黏膜免疫反應(yīng)的起始階段發(fā)揮關(guān)鍵作用，它決定黏膜免疫反應(yīng)的發(fā)生、性質(zhì)和強度。探討正常結(jié)腸黏膜上皮細(xì)胞的分離、體外培養(yǎng)方法，為研究腸黏膜上皮細(xì)胞以及與腸黏膜相關(guān)疾病建立合適的細(xì)胞模型。
培養(yǎng)信息：
包被條件：鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2）
培養(yǎng)基：含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率：每2-3天換液一次
生長特性：貼壁
細(xì)胞形態(tài)：上皮細(xì)胞樣
傳代特性：可傳1-2代
消化液：0.25%
培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；CO2，5%
兔結(jié)腸黏膜上皮細(xì)胞體外培養(yǎng)周期有限；建議使用配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng)，以此保證該細(xì)胞的佳培養(yǎng)狀態(tài)。
細(xì)胞培養(yǎng)方法：
1、細(xì)胞傳代：細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；
②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆蓋整個瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；
③1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；若細(xì)胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；
④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；
⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集，細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。
2、細(xì)胞復(fù)蘇：
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補加適量培養(yǎng)基。
3、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時進(jìn)行細(xì)胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）
②1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；
③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細(xì)胞；
④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲存。
公司產(chǎn)品：
PANC-1人胰腺癌細(xì)胞 Human pancreatic cancer cell line PANC-1 DMEM+10% FBS | 酸化糖原合酶激酶3β抗體 |
酸化鈣/鈣調(diào)素依賴蛋白激酶CAMK2B/D/G抗體 | 轉(zhuǎn)錄因子OTX1抗體 |
腫瘤壞死因子受體相關(guān)因子7抗體 | 酸化馬鈴薯球蛋白(結(jié)節(jié)性硬化)抗體 |
軸突導(dǎo)向因子1抗體 | 酸化糖原合酶激酶3β抗體 |
酸化馬鈴薯球蛋白(結(jié)節(jié)性硬化)抗體 | 轉(zhuǎn)錄因子OTX1抗體 |
壞死因子 | 中國倉鼠卵巢細(xì)胞(亞系克隆);CHO DUX B11 Carrying pBSCRLc/pTCSgpt clone 35.6 |
MIApaca-2細(xì)胞，人胰腺癌細(xì)胞 人成纖維肉瘤細(xì)胞,HT1080細(xì)胞 615小鼠肺癌瘤株;HP615 | HuH-6(人肝母細(xì)胞瘤細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 |
MuM-2C 人眼脈絡(luò)黑色素瘤細(xì)胞 | THPO Protein Human 重組人 Thrombopoietin / THPO / TPO 蛋白 (His 標(biāo)簽) |
Calu-6 人退行性癌細(xì)胞 | 人腎小球內(nèi)皮細(xì)胞裂解物HRGECL |
hFOB 1.19人SV40轉(zhuǎn)染成骨細(xì)胞 The hFOB 1.19 SV40 was ansfected io osteoblasts DMEM/F12(1:1)+10% FBS+300μg/ml G418 | 兔結(jié)腸黏膜上皮原代細(xì)胞酸化馬鈴薯球蛋白(結(jié)節(jié)性硬化)抗體 |
CL-0233THP-1(人髓系白血病單核細(xì)胞)5×106cells/瓶×2 | FZD10 Others Mouse 小鼠 FZD10 / Frizzled-10 / CD350 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) |
SELP Others Mouse 小鼠 SELP / selectin P / P-selectin 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) | CM-H113人表皮角質(zhì)形成細(xì)胞培養(yǎng)基100mL |
COLO 201(人結(jié)直腸腺癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 | 酸化原癌基因酪蛋白激酶受體RET抗體 |
軸突導(dǎo)向因子1抗體 | CAM191 EBV-轉(zhuǎn)化人淋巴細(xì)胞 |
酸化鈣/鈣調(diào)素依賴蛋白激酶CAMK2B/D/G抗體 | 腫瘤壞死因子受體相關(guān)因子7抗體 |
酸化原癌基因酪蛋白激酶受體RET抗體 | 壞死因子 |
操作步驟：
1.將無菌的蓋玻片置于細(xì)胞培養(yǎng)皿中，將細(xì)胞懸液接種于培養(yǎng)皿中進(jìn)行細(xì)胞爬片，待細(xì)胞長至80%時取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次，4%的多聚甲醛固定爬片15min，再次用PBS浸洗玻片3次，每次3min。
3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室溫孵育爬片20min，使細(xì)胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內(nèi)源性過氧化物酶，室溫孵育15min（一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫），PBS沖洗3次，每次3min。
5. 封閉血清室溫孵育20min，PBS沖洗3次，每次3min。
6. 細(xì)胞特異性一抗孵育：按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗，滴加在爬片上，于4°C濕盒中孵育一夜，PBS沖洗3次，每次3min。
7. 二抗孵育：選與一抗對應(yīng)的二抗，按比例稀釋后滴加在爬片上，37°C濕盒中孵育30min，PBS沖洗3次，每次3min。
8. 將爬片周圍水漬吸干，爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液，顯微鏡下觀察，當(dāng)出現(xiàn)棕黃色或棕褐色的陽性信號時用蒸餾水沖洗終止顯色。
9. 復(fù)染：用Harris蘇木素復(fù)染30s~1min，水洗后用1%的鹽酸酒精分化，再用蒸餾水（或PBS）水洗返藍(lán)。
10. 封片：將中性樹膠滴在爬片一側(cè)，再用蓋玻片蓋上，先放平蓋玻片一側(cè)再輕輕放下另一側(cè)，以免產(chǎn)生氣泡，封好的爬片平放置于通風(fēng)廚中晾干。
11. 鏡檢觀察。
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