化工儀器網(wǎng)
詳細介紹
本網(wǎng)站銷售的化學(xué)產(chǎn)品僅供科學(xué)研究或工業(yè)應(yīng)用，不直接用于食品、藥品、臨床或動物的診斷或治療！
細胞屬性：
方法簡介
實驗室分離的兔頜骨成纖維采用-膠原酶混合酶消化后差速貼壁制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。
質(zhì)量檢測
實驗室分離的兔頜骨成纖維經(jīng)Vimentin免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。
產(chǎn)品名稱 | 兔頜骨成纖維原代細胞 | 組織來源 | 頜骨 |
英文名稱 | Rabbit Jaw Fibroblast Cells | 貨號 | YS-01X8365 |
產(chǎn)品規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | 用途 | 僅供科研實驗 |
細胞簡介：
兔頜骨成纖維細胞分離自頜骨組織；頜骨，是指頜部的骨頭，分為上頜骨和下頜骨。構(gòu)成口腔上下部的骨頭和肌肉組織，上部叫上頜，下部叫下頜。成纖維細胞（Fibroblast）是疏松結(jié)締組織的主要細胞成分，由胚胎時期的間充質(zhì)細胞分化而來。成纖維細胞較大，輪廓清楚，多為突起的紡錘形或星形的扁平狀結(jié)構(gòu)，其細胞核呈規(guī)則的卵圓形，核仁大而明顯。成纖維細胞功能活動旺盛，細胞質(zhì)嗜弱堿性，具明顯的蛋白質(zhì)合成和分泌活動，在一定條件下，它可以實現(xiàn)跟纖維細胞的互相轉(zhuǎn)化；成纖維細胞對不同程度的細胞變性、壞死和組織缺損的修復(fù)有著十分重要的作用。剛分離的成纖維細胞呈圓形、折光性良好，懸浮于培養(yǎng)基中。30min細胞貼壁，其中部分開始伸出偽足，表現(xiàn)為小的突起；6h后細胞基本貼壁，伸展成梭形，胞核清晰，分布較均勻，散在生長，不聚集成團；細胞生長迅速，5-7天即呈融合狀態(tài)，細胞排列緊密，有的交叉重疊生長，平坦、胞體較大，細胞質(zhì)透明，細胞核較大，呈橢圓形，顏色淡。細胞融合，并彼此連接成網(wǎng)狀；細胞呈突起的紡錘形或星形的扁平分布。
培養(yǎng)信息：
培養(yǎng)基：含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率：每2-3天換液一次
生長特性：貼壁
細胞形態(tài)：成纖維細胞樣
傳代特性：可傳5代左右；3代以內(nèi)狀態(tài)佳
消化液：0.25%
培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；CO2，5%
兔頜骨成纖維細胞體外培養(yǎng)周期有限；建議使用配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng)，以此保證該細胞的佳培養(yǎng)狀態(tài)。
細胞培養(yǎng)方法：
1、細胞傳代：細胞密度達到80-90%時即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；
②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆蓋整個瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；
③1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，若大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；若細胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；
④將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；
⑥懸浮細胞直接離心收集，細胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。
2、細胞復(fù)蘇：
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補加適量培養(yǎng)基。
3、細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時進行細胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）
②1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；
③將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細胞；
④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲存。
公司產(chǎn)品：
小鼠胚胎成纖維細胞;3T6-Swiss albino | NIT1： 水解酶1抗體 0.2ml |
Rhesus antibody Rh MATR3/Matrin 3 核基質(zhì)蛋白3抗體 規(guī)格 0.1ml | Anti-TTF-1/FITC 熒光素標記甲狀腺核轉(zhuǎn)錄因子-1/甲狀腺特異增強子結(jié)合蛋白抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml |
Socs 3 (suppressor of cytokine signaling 3) 細胞因子信號傳導(dǎo)抑制蛋白3抗原 0.5mg | Anti-p38MAPK/MAPK14 原活化蛋白激酶p38抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.1ml |
Anti-GATA-5/FITC 熒光素標記抗GATA結(jié)合蛋白5抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml | Rhesus antibody Rh SKP1 S期激酶相關(guān)蛋白1抗體 規(guī)格 0.2ml |
Anti-phospho-CaMK2a (pThr286)/FITC 熒光素標記抗0酸化鈣/鈣調(diào)素依賴蛋白激酶2α抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml | Anti-ATP2c1/Ca++ ATPase/FITC 熒光素標記鈣離子ATP酶通道蛋白抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml |
SAE1 Others Human 人 SAE1 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) | ECM1 Others Mouse 小鼠 ECM1 人細胞裂解液 (陽性對照) |
人黑色素瘤細胞;A875 | IL18RAP Others Cynomolgus 食蟹猴 IL18RAP 人細胞裂解液 (陽性對照) |
BT-549(人管癌細胞) 5×106cells/瓶×2 CM-M093小鼠胎兒真皮成纖維細胞培養(yǎng)基100mL 人結(jié)直腸腺癌細胞;LoVo | AMPK Others Human 人 AMPK (G1/B1/A1) Heteroimer 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) |
TNFRSF17 Others Human 人 TNFRSF17 / BCMA / CD269 人細胞裂解液 (陽性對照) | TNFRSF14 Others Cynomolgus 食蟹猴 HVEM / TNFRSF14 人細胞裂解液 (陽性對照) |
EB病毒轉(zhuǎn)化的絨猴淋巴細胞;B95-8 | 兔頜骨成纖維原代細胞Anti-p38MAPK/MAPK14 原活化蛋白激酶p38抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.1ml |
NRG1 Others Human 人 NRG1-beta 1 (EGF Domain) 人細胞裂解液 (陽性對照) | 綠色熒光蛋白標記小鼠前胃癌細胞;MFC-GFP |
前列腺上皮細胞生長添加物PEpiCGS | 人少突膠質(zhì)前體細胞(HOPC-os)(懸浮生長) 人間充質(zhì)干細胞-臍帶 U251人膠質(zhì)瘤細胞 |
狗肺成纖維樣細胞;DogL1 非洲綠猴腎細胞，VERO C1008細胞 N/N1003A(RLE)細胞，兔晶體上皮細胞永生系 | GABA Transporter 3： γ基運載蛋白3抗體 0.2ml |
Human lymphocyte function associated antigen 2,LFA-2 ELISA Kit 人淋巴細胞功能相關(guān)抗原2Multi-class antibodies規(guī)格： 48T | CD4 Others Ferret 雪貂 CD4 / Leu-3 人細胞裂解液 (陽性對照) |
CD34抗體(細胞表面的唾液粘蛋白) Anti-CD34 0.1ml | DHEA-S ELISA Kit 大鼠脫氫表雄酮酯 96T |
Phospho-ATP1A1 (Ser16)： 0酸化ATP酶蛋白a1抗體 0.1ml | SAE1 Others Human 人 SAE1 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) |
操作步驟：
1.將無菌的蓋玻片置于細胞培養(yǎng)皿中，將細胞懸液接種于培養(yǎng)皿中進行細胞爬片，待細胞長至80%時取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次，4%的多聚甲醛固定爬片15min，再次用PBS浸洗玻片3次，每次3min。
3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室溫孵育爬片20min，使細胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內(nèi)源性過氧化物酶，室溫孵育15min（一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫），PBS沖洗3次，每次3min。
5. 封閉血清室溫孵育20min，PBS沖洗3次，每次3min。
6. 細胞特異性一抗孵育：按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗，滴加在爬片上，于4°C濕盒中孵育一夜，PBS沖洗3次，每次3min。
7. 二抗孵育：選與一抗對應(yīng)的二抗，按比例稀釋后滴加在爬片上，37°C濕盒中孵育30min，PBS沖洗3次，每次3min。
8. 將爬片周圍水漬吸干，爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液，顯微鏡下觀察，當(dāng)出現(xiàn)棕黃色或棕褐色的陽性信號時用蒸餾水沖洗終止顯色。
9. 復(fù)染：用Harris蘇木素復(fù)染30s~1min，水洗后用1%的鹽酸酒精分化，再用蒸餾水（或PBS）水洗返藍。
10. 封片：將中性樹膠滴在爬片一側(cè)，再用蓋玻片蓋上，先放平蓋玻片一側(cè)再輕輕放下另一側(cè)，以免產(chǎn)生氣泡，封好的爬片平放置于通風(fēng)廚中晾干。
11. 鏡檢觀察。
化工儀器網(wǎng)