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詳細(xì)介紹
兔海綿體平滑肌原代細(xì)胞
兔海綿體平滑肌細(xì)胞分離自海綿體組織；海綿體，又稱海綿體肌，是硬的平滑肌和結(jié)締組織。海綿體是一種勃起組織，外面包有堅厚的白膜，內(nèi)部由結(jié)締組織和平滑肌組成海綿狀支架，其腔隙與血管相通。它主要包括海綿體內(nèi)皮細(xì)胞、平滑肌細(xì)胞和成纖維細(xì)胞3種細(xì)胞成分。其中平滑肌細(xì)胞和成纖維細(xì)胞鑲嵌于海綿體細(xì)胞外基質(zhì)的膠原中，在消化海綿體組織時，膠原酶的作用主要是松解海綿體內(nèi)皮細(xì)胞與基膜的聯(lián)系，破壞海綿體內(nèi)皮細(xì)胞間的緊密連接。因此可用膠原酶分離出海綿體平滑肌細(xì)胞。平滑肌，是非橫紋肌的肌肉組織。分布在人體動脈和靜脈血管壁、膀胱、子宮、男性和女性生殖道、消化道、呼吸道、眼睛的睫狀肌和虹膜。平滑肌細(xì)胞原代分離培養(yǎng)3天后，可見細(xì)胞貼壁伸展，細(xì)胞形態(tài)大小不一，呈梭形、不規(guī)則形、三角形或扇形，核卵圓形、居中；2周后細(xì)胞匯合，多數(shù)細(xì)胞伸展呈長梭形，胞漿豐富，有分枝狀突起，細(xì)胞平行排列成單層或部分區(qū)域多層重疊生長，高低起伏；細(xì)胞密度低時，常交織成網(wǎng)狀；密度高時，則排列為旋渦狀或柵欄狀。傳代后細(xì)胞生長較快，4-6天即可匯合，并保持上述形態(tài)學(xué)特征和生長特點。
英文名稱 | Rabbit Corpora Cavernous Smooth Muscle Cells | 組織來源 | 海綿體 |
產(chǎn)品規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | 產(chǎn)品貨號 | YS-01X7954 |
細(xì)胞形態(tài) | 成纖維細(xì)胞樣 | 生長特性 | 貼壁 |
產(chǎn)品名稱：兔海綿體平滑肌細(xì)胞
組織來源：海綿體
產(chǎn)品規(guī)格：5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶
培養(yǎng)基：含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率：每2-3天換液一次
生長特性：貼壁
細(xì)胞形態(tài)：成纖維細(xì)胞樣
傳代特性：可傳3-5代左右；3代以內(nèi)狀態(tài)佳
消化液：0.25%
培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；CO2，5%
兔海綿體平滑肌細(xì)胞體外培養(yǎng)周期有限；建議使用配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng)，以此保證該細(xì)胞的佳培養(yǎng)狀態(tài)。
方法簡介
實驗室分離的兔海綿體平滑肌采用膠原酶消化法結(jié)合差速貼壁法制備而來，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。
質(zhì)量檢測
實驗室分離的兔海綿體平滑肌經(jīng)α-SMA免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。
1、細(xì)胞傳代：細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；
②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆蓋整個瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；
③1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；若細(xì)胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；
④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；
⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集，細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。
2、細(xì)胞復(fù)蘇：
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補(bǔ)加適量培養(yǎng)基。
3、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時進(jìn)行細(xì)胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）
②1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；
③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細(xì)胞；
④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲存。
MEF, 小鼠胚胎成纖維細(xì)胞 人胰腺癌細(xì)胞，NCL-H548細(xì)胞 MDCK (NBL-2)(狗腎細(xì)胞) | Rhesus antibody Rh GDF8 生長分化因子8/肌肉抑制素抗體 規(guī)格 0.2ml |
I CTP(Human Cross-linked Carboxy-terminal telopeptide of type I collagen) ELISA Kit 人Ⅰ型膠原交聯(lián)羧基末端肽Multi-class antibodies規(guī)格： 48T | IgG/Gold 膠體金標(biāo)記的小鼠抗大鼠IgG 2ml |
IL-9： 白介素9抗體 0.1ml | Human anti-IgA antibody ELISA Kit 人抗IgA抗體 96T |
Rhesus antibody Rh RENBP 腎素結(jié)合蛋白抗體 規(guī)格 0.2ml | Anti-Leptin receptor(long)/FITC 熒光素標(biāo)記瘦素受體抗體(長)IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml |
Rhesus antibody Rh phospho-STAT6(Tyr641) 0酸化信號轉(zhuǎn)導(dǎo)和轉(zhuǎn)錄激活因子6抗體 規(guī)格 0.1ml | sMHC-1(Mouse soluble myosin heavy chain 2) ELISA Kit 小鼠可溶性肌球蛋白重鏈1 96T |
人惡性黑色素瘤細(xì)胞;A-375 [A375] | CL-0439SK-CO-1(人結(jié)直腸腺癌細(xì)胞)5×106cells/瓶×2 |
人細(xì)胞;Hela P10s-11F 大鼠血管外膜成纖維細(xì)胞培養(yǎng)基 100mL | 4T1 小鼠癌細(xì)胞 |
小腸隱窩上皮細(xì)胞Many types of cells包裝：5 × 105次方(1ml) | NCI-H23(人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 |
B16-F10, 小鼠黑色素瘤高轉(zhuǎn)移細(xì)胞 | 人氣管上皮細(xì)胞裂解物HTEpiCL |
MEG-01細(xì)胞，人成巨核細(xì)胞白血病細(xì)胞 正常小鼠Leydig細(xì)胞,TM3細(xì)胞 間充質(zhì)干細(xì)胞生長添加物MSCGS | 兔海綿體平滑肌原代細(xì)胞Human anti-IgA antibody ELISA Kit 人抗IgA抗體 96T |
III型膠原酶(含100mL酶解緩沖液) 10mL | ADAM12 Others Human 人 ADAM12 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) |
FGFR2 Others Mouse 小鼠 FGFR2 / CD332 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) | CM-H105人皮下脂肪細(xì)胞培養(yǎng)基100mL |
體細(xì)胞;HEL | Rhesus antibody Rh APAF1(NT) 凋亡蛋白活性因子-1抗體(N端) 規(guī)格 0.1ml |
BDP： 母細(xì)胞瘤相關(guān)蛋白ARID3B抗體 0.2ml | MHCC97-H 高轉(zhuǎn)移人肝癌細(xì)胞 |
Anti-VEGF-A/FITC 熒光素標(biāo)記血管內(nèi)皮生長因子A抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml | PRSS3： 腦酶3抗體 0.2ml |
Anti-CDK8/FITC 熒光素標(biāo)記周期素依賴性激酶8抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml | 人惡性黑色素瘤細(xì)胞;A-375 [A375] |
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有 1mL 細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘，棄去上清液，補(bǔ) 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜（或?qū)?細(xì)胞懸液加入 10cm 皿中，加入約 8ml 培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并 檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細(xì)胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分 變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化。
3. 按 6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘，棄去上清液，補(bǔ)加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細(xì)胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面 T25 瓶為類；
1. 細(xì)胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml ，細(xì)胞變圓 脫 落后，加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計數(shù)板計數(shù)。
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