化工儀器網(wǎng)
詳細(xì)介紹
本網(wǎng)站銷售的化學(xué)產(chǎn)品僅供科學(xué)研究或工業(yè)應(yīng)用，不直接用于食品、藥品、臨床或動(dòng)物的診斷或治療！
細(xì)胞屬性：
方法簡(jiǎn)介
實(shí)驗(yàn)室分離的兔冠狀動(dòng)脈平滑肌采用-膠原酶聯(lián)合消化法結(jié)合差速貼壁法制備而來，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。
質(zhì)量檢測(cè)
實(shí)驗(yàn)室分離的兔冠狀動(dòng)脈平滑肌經(jīng)α-SMA免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。
產(chǎn)品名稱 | 兔冠狀動(dòng)脈平滑肌原代細(xì)胞 | 組織來源 | 冠狀動(dòng)脈 |
英文名稱 | Rabbit Coronary Artery Smooth Muscle Cells | 貨號(hào) | YS-01X8125 |
產(chǎn)品規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | 用途 | 僅供科研實(shí)驗(yàn) |
細(xì)胞簡(jiǎn)介：
兔冠狀動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞分離自冠狀動(dòng)脈組織；冠狀動(dòng)脈是供給心臟血液的動(dòng)脈，起于主動(dòng)脈根部，分左右兩支，行于心臟表面。采用Schlesinger等的分類原則，將冠狀動(dòng)脈的分布分為三型：右優(yōu)勢(shì)型、均衡型、左優(yōu)勢(shì)型。左右冠狀動(dòng)脈是升主動(dòng)脈的第一對(duì)分支。左冠狀動(dòng)脈為一短干，發(fā)自左主動(dòng)脈竇，經(jīng)肺動(dòng)脈起始部和左心耳之間，沿冠狀溝向左前方行后，立即分為前室間支和旋支。前室間支沿前室間溝下行，旋支繞過心尖切跡至心的膈面與右冠狀動(dòng)脈的后室間支相吻合。它是構(gòu)成冠狀動(dòng)脈壁的主要細(xì)胞成分，細(xì)胞膜上分布著多種離子通道，如電壓依賴性Na+通道、多種Ca2+通道和K+通道；它們參與了靜息電位的維持與細(xì)胞膜電位的復(fù)極化、超極化，調(diào)節(jié)血管平滑肌的收縮及舒張功能，此外動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)展也涉及冠狀動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞增殖、炎癥及凋亡等。因此，原代分離培養(yǎng)的冠狀動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞，對(duì)研究生理和病理狀態(tài)下離子通道及血管張力變化機(jī)制具有非常重要的作用。冠狀動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞原代分離培養(yǎng)3天后，可見細(xì)胞貼壁伸展，細(xì)胞形態(tài)大小不一，呈梭形、不規(guī)則形、三角形或扇形，核卵圓形、居中；2周后細(xì)胞匯合，多數(shù)細(xì)胞伸展呈長(zhǎng)梭形，胞漿豐富，有分枝狀突起，細(xì)胞平行排列成單層或部分區(qū)域多層重疊生長(zhǎng)，高低起伏；細(xì)胞密度低時(shí)，常交織成網(wǎng)狀；密度高時(shí)，則排列為旋渦狀或柵欄狀。傳代后細(xì)胞生長(zhǎng)較快，4-6天即可匯合，并保持上述形態(tài)學(xué)特征和生長(zhǎng)特點(diǎn)。
培養(yǎng)信息：
培養(yǎng)基：含FBS、生長(zhǎng)添加劑、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率：每2-3天換液一次
生長(zhǎng)特性：貼壁
細(xì)胞形態(tài)：成纖維細(xì)胞樣
傳代特性：可傳5代左右；3代以內(nèi)狀態(tài)佳
消化液：0.25%
培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；CO2，5%
兔冠狀動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞體外培養(yǎng)周期有限；建議使用配套的專用生長(zhǎng)培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng)，以此保證該細(xì)胞的佳培養(yǎng)狀態(tài)。
細(xì)胞培養(yǎng)方法：
1、細(xì)胞傳代：細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時(shí)即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；
②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆蓋整個(gè)瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；
③1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；若細(xì)胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；
④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；
⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集，細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。
2、細(xì)胞復(fù)蘇：
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時(shí)間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補(bǔ)加適量培養(yǎng)基。
3、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)進(jìn)行細(xì)胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）
②1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；
③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細(xì)胞；
④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時(shí)后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲(chǔ)存。
公司產(chǎn)品：
小鼠胚胎成纖維細(xì)胞;BALB/C 3T3 | Anti-Phospho-Tyrosine Hydroxylase (Ser40) 0酸化酪羥化酶抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.1ml |
cPLA2(Human cytosolic phospholipase A2) ELISA Kit 人胞漿型0脂酶A2 96T | Mouse Anti-YERSINIA PESTIS Monoclonal Anti-body /FITC 熒光素標(biāo)記鼠抗鼠疫F1蛋白/鼠疫耶爾森氏菌莢膜抗原F1單克隆抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml |
Rhesus antibody Rh THRA1 甲狀腺激素受體α1抗體 規(guī)格 0.2ml | LMP7/PSMB99Human low molecular-weight protein/proteasome beta-type subunit) ELISA Kit 人低分子質(zhì)量蛋白7/β型蛋白酶體9Multi-class antibodies規(guī)格： 48T |
HAPLN2： 透明質(zhì)酸及粘蛋白2抗體 0.2ml | Rhesus antibody Rh caspase-9 p10 半胱胺酸蛋白酶蛋白9-p10抗體 規(guī)格 0.2ml |
FOXD2： 叉頭蛋白D2抗體 0.2ml | ASD ELISA Kit 大鼠雄Multi-class antibodies規(guī)格： 48T |
ORM2 Others Human 人 ORM2 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) | EFNA1 Others Mouse 小鼠 EFNA1 / Ephrin-A1 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) |
人紅系白血病細(xì)胞;TF-1 | 人脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞(脂肪)(HMSC-ad)(5×105) |
KLE(人子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 大鼠 DLL1 / Delta-like 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) | PTN Others Mouse 小鼠 Pleioophin / PTN / HB-GAM 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) |
5E Others Mouse 小鼠 5E / CD73 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) | HBSMC Pellet 人支氣管平滑肌細(xì)胞團(tuán)塊 > 1 mio.cells 人間充質(zhì)干細(xì)胞-脂肪裂解物HMSC-ad L |
EB病毒轉(zhuǎn)化的絨猴淋巴細(xì)胞;B95-8 | 兔冠狀動(dòng)脈平滑肌原代細(xì)胞LMP7/PSMB99Human low molecular-weight protein/proteasome beta-type subunit) ELISA Kit 人低分子質(zhì)量蛋白7/β型蛋白酶體9Multi-class antibodies規(guī)格： 48T |
人外殼細(xì)胞(HHorSC)( 5×105 ) CSC, 小鼠心肌細(xì)胞 Mouse | CM-R018大鼠頜下腺上皮細(xì)胞培養(yǎng)基100mL |
786-O [786-0], 人腎透明腺癌細(xì)胞 Human | RWPE1細(xì)胞，人前列腺上皮細(xì)胞 鼬肺上皮細(xì)胞,MV-1-Lu細(xì)胞 小鼠海馬趾元MN-h |
NRBF2 Others Human 人 NRBF2 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) | Anti-RAR- Alpha /FITC 熒光素標(biāo)記維受體-α 抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml |
Orosomucoid 2： 類粘蛋白2抗體 0.2ml | 人胚肺細(xì)胞系;KuMA 人肝內(nèi)膽管上皮細(xì)胞培養(yǎng)基 100mL |
Somatostatin Receptor 2： 受體2抗體 0.1ml | phospho-CDKN2A (Ser152)： 0酸化抑癌基因p16抗體 0.1ml |
Rhesus antibody Rh IgG 驢抗豚鼠IgG 規(guī)格 1mg | ORM2 Others Human 人 ORM2 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) |
操作步驟：
1.將無菌的蓋玻片置于細(xì)胞培養(yǎng)皿中，將細(xì)胞懸液接種于培養(yǎng)皿中進(jìn)行細(xì)胞爬片，待細(xì)胞長(zhǎng)至80%時(shí)取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次，4%的多聚甲醛固定爬片15min，再次用PBS浸洗玻片3次，每次3min。
3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室溫孵育爬片20min，使細(xì)胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內(nèi)源性過氧化物酶，室溫孵育15min（一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫），PBS沖洗3次，每次3min。
5. 封閉血清室溫孵育20min，PBS沖洗3次，每次3min。
6. 細(xì)胞特異性一抗孵育：按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗，滴加在爬片上，于4°C濕盒中孵育一夜，PBS沖洗3次，每次3min。
7. 二抗孵育：選與一抗對(duì)應(yīng)的二抗，按比例稀釋后滴加在爬片上，37°C濕盒中孵育30min，PBS沖洗3次，每次3min。
8. 將爬片周圍水漬吸干，爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液，顯微鏡下觀察，當(dāng)出現(xiàn)棕黃色或棕褐色的陽性信號(hào)時(shí)用蒸餾水沖洗終止顯色。
9. 復(fù)染：用Harris蘇木素復(fù)染30s~1min，水洗后用1%的鹽酸酒精分化，再用蒸餾水（或PBS）水洗返藍(lán)。
10. 封片：將中性樹膠滴在爬片一側(cè)，再用蓋玻片蓋上，先放平蓋玻片一側(cè)再輕輕放下另一側(cè)，以免產(chǎn)生氣泡，封好的爬片平放置于通風(fēng)廚中晾干。
11. 鏡檢觀察。
化工儀器網(wǎng)