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詳細(xì)介紹
本網(wǎng)站銷售的化學(xué)產(chǎn)品僅供科學(xué)研究或工業(yè)應(yīng)用，不直接用于食品、藥品、臨床或動物的診斷或治療！
細(xì)胞屬性：
方法簡介
實驗室分離的兔骨髓單個核采用取骨髓、通過密度梯度離心法制備而來，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。
質(zhì)量檢測
實驗室分離的兔骨髓單個核經(jīng)過檢測，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。
產(chǎn)品名稱 | 兔骨髓單個核原代細(xì)胞 | 組織來源 | 骨髓 |
英文名稱 | Rabbit Bone Marrow Mononuclear Cells | 貨號 | YS-01X8355 |
產(chǎn)品規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | 用途 | 僅供科研實驗 |
細(xì)胞簡介：
兔骨髓單個核細(xì)胞分離自骨髓；骨髓是機(jī)體的造血組織，位于身體的許多骨骼內(nèi)。成年動物的骨髓分兩種：紅骨髓和黃骨髓。紅骨髓能制造紅細(xì)胞、血小板和各種白細(xì)胞。血小板有止血作用，白細(xì)胞能殺滅與抑制各種病原體，包括細(xì)菌、病毒等；某些淋巴細(xì)胞能制造抗體。因此，骨髓不但是造血器官，它還是重要的免疫器官。骨髓是存在于長骨（如肱骨、股骨）的骨髓腔和扁平骨（如髂骨）的稀松骨質(zhì)間的網(wǎng)眼中，是一種海綿狀的組織，能產(chǎn)生血細(xì)胞的骨髓略呈紅色，稱為紅骨髓。出生時，紅骨髓充滿全身骨髓腔，隨著年齡增大，脂肪細(xì)胞增多，相當(dāng)部分紅骨髓被黃骨髓取代，后幾乎只有扁平骨骨髓腔中有紅骨髓。骨髓單個核細(xì)胞是骨髓中具有單個核的細(xì)胞，包括淋巴細(xì)胞和單核細(xì)胞。注意這里是（mononuclear cell）單個核細(xì)胞，而不是（Monocyte）單核細(xì)胞。單個核細(xì)胞的體積、形態(tài)和比重與骨髓其他細(xì)胞不同，利用一定比例聚蔗糖和鈉形成的等滲溶液作密度梯度離心，使一定密度的細(xì)胞按相應(yīng)密度梯度分布，可將各種血細(xì)胞與單個核細(xì)胞分離。
培養(yǎng)信息：
培養(yǎng)基：含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率：每2-3天換液一次
生長特性：半貼壁半懸浮
細(xì)胞形態(tài)：圓形
傳代特性：不增殖；不傳代
消化液：0.25%
培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；CO2，5%
兔骨髓單個核細(xì)胞體外培養(yǎng)周期有限；建議使用配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng)，以此保證該細(xì)胞的佳培養(yǎng)狀態(tài)。
細(xì)胞培養(yǎng)方法：
1、細(xì)胞傳代：細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；
②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆蓋整個瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；
③1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；若細(xì)胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；
④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；
⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集，細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。
2、細(xì)胞復(fù)蘇：
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補(bǔ)加適量培養(yǎng)基。
3、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時進(jìn)行細(xì)胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）
②1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；
③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細(xì)胞；
④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲存。
公司產(chǎn)品：
小鼠皮質(zhì)元MN-c | Nogo-A： 軸索過度生長抑制因子-A抗體 0.1ml |
Rhesus antibody Rh Matriptase 2 膜型絲蛋白酶2抗體 規(guī)格 0.2ml | Anti-TSLP/FITC 熒光素標(biāo)記淋巴細(xì)胞生成素-1抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml |
Somatostatin/GRIH 抗原 0.5mg | Anti-P2Y1R/P2ry1 P2Y1受體抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.2ml |
Anti-Brs3/Bombesin Receptor 3/FITC 熒光素標(biāo)記蛙皮素受體3抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml | Rhesus antibody Rh SLAMF7/CD319 SLAMF7抗體 規(guī)格 0.2ml |
Anti-phospho-ERK1(pThr202/pTyr204)/FITC 熒光素標(biāo)記抗0酸化原活化蛋白激酶1抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml | Anti-ATH III /FITC 熒光素標(biāo)記抗Ⅲ抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml |
KEAP1 Others Human 人 KEAP1 / INRF2 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對照) | CDH12 Others Human 人 CDH12 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) |
人滑膜細(xì)胞HS | EPHA4 Others Rat 大鼠 EphA4 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) |
HHpC-c 人肝細(xì)胞(HHpC) 3-6 mio. 人支氣管平滑肌細(xì)胞HBSMC | CDK1 Others Human 人 CDC2 Kinase / CDK1 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對照) |
SF-295(人XG惡性膠質(zhì)瘤細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 胎盤羊膜細(xì)胞Many types of cells包裝：5 × 105次方(1ml) | IgG Others Rabbit 兔 IgG-Fc (185 Thr/Ala, Asn 284/Ser) 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) |
H9c2大鼠心肌細(xì)胞(ATCC來源) | 兔骨髓單個核原代細(xì)胞Anti-P2Y1R/P2ry1 P2Y1受體抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.2ml |
Spike Others MERS-CoV 中東呼吸綜合征 MERS-CoV (HCoV-EMC/2012) Spike Protein fragme (aa 383-502) 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對照) | P815 小鼠肥大細(xì)胞癌細(xì)胞 |
前列腺平滑肌細(xì)胞Many types of cells包裝：5 × 105次方(1ml) | LEPR Others Human 人 Leptin Receptor / LEPR / CD295 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) |
NCI-N87細(xì)胞，人胃癌細(xì)胞 人淋巴細(xì)胞與倉鼠肺細(xì)胞雜交細(xì)胞,FD6細(xì)胞 CL-0387MS751(人子宮頸表皮癌細(xì)胞)5×106cells/瓶×2 | GIMAP3： GTP酶IMAP家族成員3抗體 0.2ml |
Human Tissue factor,IF ELISA Kit 人組織因子Multi-class antibodies規(guī)格： 48T | PCNA Others Human 人 PCNA 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對照) |
營養(yǎng)因子-3抗體 Anti-NT-3 0.1ml | F-TESTO ELISA Kit 大鼠游離睪酮 96T |
Phospho-Ack1 (Tyr859 + 860)： 0酸化Ack1抗體 0.1ml | KEAP1 Others Human 人 KEAP1 / INRF2 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對照) |
操作步驟：
1.將無菌的蓋玻片置于細(xì)胞培養(yǎng)皿中，將細(xì)胞懸液接種于培養(yǎng)皿中進(jìn)行細(xì)胞爬片，待細(xì)胞長至80%時取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次，4%的多聚甲醛固定爬片15min，再次用PBS浸洗玻片3次，每次3min。
3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室溫孵育爬片20min，使細(xì)胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內(nèi)源性過氧化物酶，室溫孵育15min（一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫），PBS沖洗3次，每次3min。
5. 封閉血清室溫孵育20min，PBS沖洗3次，每次3min。
6. 細(xì)胞特異性一抗孵育：按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗，滴加在爬片上，于4°C濕盒中孵育一夜，PBS沖洗3次，每次3min。
7. 二抗孵育：選與一抗對應(yīng)的二抗，按比例稀釋后滴加在爬片上，37°C濕盒中孵育30min，PBS沖洗3次，每次3min。
8. 將爬片周圍水漬吸干，爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液，顯微鏡下觀察，當(dāng)出現(xiàn)棕黃色或棕褐色的陽性信號時用蒸餾水沖洗終止顯色。
9. 復(fù)染：用Harris蘇木素復(fù)染30s~1min，水洗后用1%的鹽酸酒精分化，再用蒸餾水（或PBS）水洗返藍(lán)。
10. 封片：將中性樹膠滴在爬片一側(cè)，再用蓋玻片蓋上，先放平蓋玻片一側(cè)再輕輕放下另一側(cè)，以免產(chǎn)生氣泡，封好的爬片平放置于通風(fēng)廚中晾干。
11. 鏡檢觀察。
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