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詳細(xì)介紹
兔肺微血管平滑肌原代細(xì)胞
兔肺微血管平滑肌細(xì)胞分離自肺組織；肺是機(jī)體的呼吸器官，位于胸腔，左右各一，覆蓋于心之上。肺有分葉，左二右三，共五葉。肺經(jīng)肺系（指氣管、支氣管等）與喉、鼻相連，故稱喉為肺之門戶，鼻為肺之外竅。肺血管平滑肌細(xì)胞原代分離培養(yǎng)3天后，可見細(xì)胞貼壁伸展，細(xì)胞形態(tài)大小不一，呈梭形、不規(guī)則形、三角形或扇形，核卵圓形、居中；2周后細(xì)胞匯合，多數(shù)細(xì)胞伸展呈長(zhǎng)梭形，胞漿豐富，有分枝狀突起，細(xì)胞平行排列成單層或部分區(qū)域多層重疊生長(zhǎng)，高低起伏；細(xì)胞密度低時(shí)，常交織成網(wǎng)狀；密度高時(shí)，則排列為旋渦狀或柵欄狀。傳代后細(xì)胞生長(zhǎng)較快，4-6天即可匯合，并保持上述形態(tài)學(xué)特征和生長(zhǎng)特點(diǎn)。肺血管平滑肌細(xì)胞主要功能：①細(xì)胞表面表達(dá)介質(zhì)（ICAM-1和VCAM-1）參與血管壁炎癥反應(yīng)；②是多數(shù)重要?jiǎng)用}疾病的靶細(xì)胞。肺血管平滑肌細(xì)胞與主要病生理變化：①平滑肌增生易致肺動(dòng)脈高壓；②先天性肺動(dòng)脈狹窄；③肺動(dòng)脈栓塞。血管平滑肌細(xì)胞的加速生長(zhǎng)潛能是血管疾病進(jìn)展的關(guān)鍵因素，新研究表明血管平滑肌細(xì)胞表達(dá)的ICAM-1和VCAM-1能促進(jìn)血管壁的炎癥反應(yīng)，并且與血管疾病的發(fā)展及穩(wěn)定性有關(guān)。
英文名稱 | Rabbit Pulmonary Microvascular Smooth Muscle Cells | 組織來源 | 肺 |
產(chǎn)品規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | 產(chǎn)品貨號(hào) | YS-01X8341 |
細(xì)胞形態(tài) | 成纖維細(xì)胞樣 | 生長(zhǎng)特性 | 貼壁 |
產(chǎn)品名稱：兔肺微血管平滑肌細(xì)胞
組織來源：肺
產(chǎn)品規(guī)格：5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶
培養(yǎng)基：含FBS、生長(zhǎng)添加劑、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率：每2-3天換液一次
生長(zhǎng)特性：貼壁
細(xì)胞形態(tài)：成纖維細(xì)胞樣
傳代特性：可傳3代左右
消化液：0.25%
培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；CO2，5%
兔肺微血管平滑肌細(xì)胞體外培養(yǎng)周期有限；建議使用配套的專用生長(zhǎng)培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng)，以此保證該細(xì)胞的佳培養(yǎng)狀態(tài)。
方法簡(jiǎn)介
實(shí)驗(yàn)室分離的兔肺微血管平滑肌采用混合膠原酶消化法制備而來，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。
質(zhì)量檢測(cè)
實(shí)驗(yàn)室分離的兔肺微血管平滑肌經(jīng)α-SMA免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。
1、細(xì)胞傳代：細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時(shí)即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；
②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆蓋整個(gè)瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；
③1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；若細(xì)胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；
④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；
⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集，細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。
2、細(xì)胞復(fù)蘇：
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時(shí)間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補(bǔ)加適量培養(yǎng)基。
3、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)進(jìn)行細(xì)胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）
②1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；
③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細(xì)胞；
④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時(shí)后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲(chǔ)存。
小鼠腎足細(xì)胞;Mouse podocyte | NIS： 轉(zhuǎn)運(yùn)體蛋白抗體 0.2ml |
Rhesus antibody Rh MBNL3 毒蕈堿樣蛋白3抗體 規(guī)格 0.2ml | Anti-TSHR(NT)/FITC 熒光素標(biāo)記促甲狀腺素受體抗體(N端)IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml |
SRF(Serum response factor) 血清應(yīng)答因子抗原 0.5mg | Anti-P16 抑癌基因p16抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.1ml |
Anti-GAPDH/FITC 熒光素標(biāo)記3-0酸甘油醛脫氫酶IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml | Rhesus antibody Rh SLC14A1/RACH1 尿素轉(zhuǎn)運(yùn)型糖蛋白抗體 規(guī)格 0.2ml |
Anti-Phospho-FAK (Tyr925) /FITC 熒光素標(biāo)記兔抗人、大、小鼠0酸化粘著斑激酶抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml | Anti-ATF6/FITC 熒光素標(biāo)記活化轉(zhuǎn)錄因子6抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml |
TNFRSF9 Others Canine 狗 CD137 / 4-1BB / TNFRSF9 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) | 雙位點(diǎn)HC-kit受體細(xì)胞株;DMF7 人子宮內(nèi)膜上皮細(xì)胞培養(yǎng)基 100mL |
人脊髓星形膠質(zhì)細(xì)胞總RNAHA-sp NA | PRL Others Mouse 小鼠 PRL / Prolactin 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) |
MDA-MB-436(人癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 L929(成纖維細(xì)胞) | TEK Others Cynomolgus 食蟹猴 Tie2 / TEK 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) |
FLT4 Others Mouse 小鼠 FLT-4 / VEGFR3 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) | IgG3 Others Mouse 小鼠 IgG3-Fc 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) |
II型肺泡上皮細(xì)胞Many types of cells包裝：5 × 105次方(1ml) | 兔肺微血管平滑肌原代細(xì)胞Anti-P16 抑癌基因p16抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.1ml |
ITK Others Mouse 小鼠 ITK Kinase (aa 351-619) 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) | CCL11 Protein Human 重組人 CCL11 蛋白 (His 標(biāo)簽) |
氣管上皮細(xì)胞Many types of cells包裝：5 × 105次方(1ml) | LCN2 Others Human 人 LCN2 / NGAL 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) |
狗腎細(xì)胞;Super Tube 胚胎成纖維細(xì)胞，3T6-Swiss albino細(xì)胞 Hed68細(xì)胞，果子貍腎上皮細(xì)胞 | GIMAP7： GTP酶IMAP家族成員7抗體 0.2ml |
Human thrombomodulin,TM ELISA Kit 人血栓調(diào)節(jié)蛋白Multi-class antibodies規(guī)格： 48T | ALCAM Others Rat 大鼠 ALCAM / CD166 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) |
纖毛蛋白-2抗體 Anti-NRP-2 0.1ml | E3 ELISA Kit 大鼠雌三醇 96T |
phospho-ATM(Ser1981)： 0酸化毛細(xì)血管擴(kuò)張性共濟(jì)失調(diào)癥突變蛋白抗體 0.1ml | TNFRSF9 Others Canine 狗 CD137 / 4-1BB / TNFRSF9 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) |
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有 1mL 細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘，棄去上清液，補(bǔ) 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜（或?qū)?細(xì)胞懸液加入 10cm 皿中，加入約 8ml 培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并 檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤(rùn)洗細(xì)胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分 變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化。
3. 按 6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘，棄去上清液，補(bǔ)加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細(xì)胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面 T25 瓶為類；
1. 細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml ，細(xì)胞變圓 脫 落后，加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。
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