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詳細介紹
人源NK原代細胞?細胞
人NK細胞分離自人外周血單個核細胞；NK細胞即自然殺傷細胞（natural killer cell，NK）是機體重要的免疫細胞，不僅與抗腫瘤、 抗病毒感染和免疫調(diào)節(jié)有關(guān)，而且在某些情況下參與超敏反應(yīng)和自身免疫性疾病的發(fā)生，能夠識別靶細胞、殺傷介質(zhì)。NK細胞來源于骨髓淋巴樣干細胞，其分化、發(fā)育依賴于骨髓及胸腺微環(huán)境，主要分布于骨髓、外周血、肝、脾、肺和淋巴結(jié)。NK細胞不同于T、B細胞，是一類無需預(yù)先致敏就能非特異性殺傷腫瘤細胞和病毒感染細胞的淋巴細胞。由于NK細胞的殺傷活性無MHC限制，不依賴抗體，因此稱為自然殺傷活性。NK細胞胞漿豐富，含有較大的嗜天青顆粒，顆粒的含量與NK細胞的殺傷活性呈正相關(guān)。NK細胞作用于靶細胞后殺傷作用出現(xiàn)早，在體外1小時、體內(nèi)4小時即可見到殺傷效應(yīng)。NK細胞的靶細胞主要有某些腫瘤細胞（包括部分細胞系）、病毒感染細胞、某些自身組織細胞（如血細胞）、寄生蟲等，因此NK細胞是機體抗腫瘤、抗感染的重要免疫因素，也參與第Ⅱ型超敏反應(yīng)和移植物抗宿主反應(yīng)。
英文名稱 | Human Natural killer Cells | 組織來源 | 外周血 |
產(chǎn)品規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | 產(chǎn)品貨號 | YS-01X7512 |
細胞形態(tài) | 短梭形 | 生長特性 | 貼壁 |
產(chǎn)品名稱：人源NK細胞
組織來源：外周血
產(chǎn)品規(guī)格：5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶
培養(yǎng)基 含IL-2、IL-15、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率 每2-3天換液一次
生長特性 懸浮
細胞形態(tài) 短梭形
傳代特性 可傳5代左右；3代以內(nèi)狀態(tài)佳
消化液 0.25%
培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%
方法簡介
公司實驗室分離的人外周血NK采用取外周血、通過密度梯度離心、差速貼壁、細胞因子誘導(dǎo)法制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。
質(zhì)量檢測
公司實驗室分離的人源NK經(jīng)CD56免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。
1、細胞傳代：細胞密度達到80-90%時即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；
②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆蓋整個瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；
③1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，若大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；若細胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；
④將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；
⑥懸浮細胞直接離心收集，細胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。
2、細胞復(fù)蘇：
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補加適量培養(yǎng)基。
3、細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時進行細胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）
②1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；
③將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細胞；
④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲存。
小鼠誘導(dǎo)性多潛能干細胞;PUMC-mips-D2 | Anti-Tubulin-alpha 微管蛋白抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.1ml |
STK(Human serine/threonine protein kinase) ELISA Kit 人絲酸/蘇酸蛋酸酶 96T | Anti-MMP-9/FITC 熒光素標(biāo)記基質(zhì)金屬蛋白酶-9蛋白抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml |
Rhesus antibody Rh TIAM1 T淋巴瘤侵襲轉(zhuǎn)移誘導(dǎo)蛋白1抗體 規(guī)格 0.1ml | MMP-2/Gelatinase A(Human Matrix metalloproteinase 2/Gelatinase A) ELISA kit 人基質(zhì)金屬蛋白酶2/明膠酶AMulti-class antibodies規(guī)格： 48T |
HSF2 binding protein： 熱休克因子2結(jié)合蛋白抗體 0.2ml | Rhesus antibody Rh CATSPER 陽離子通道相關(guān)蛋白1抗體 規(guī)格 0.2ml |
phospho-FOXO4 (Ser197)： 0酸化叉頭蛋白4抗體 0.1ml | Resistin ELISA Kit 大鼠抵抗素Multi-class antibodies規(guī)格： 48T |
ALOX15B Others Human 人 ALOX15B / 15 Lipoxygenase 2 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) | ADAM12 Others Human 人 ADAM12 人細胞裂解液 (陽性對照) |
人結(jié)直腸腺癌細胞;HCT-8 [HRT-18] | FAM3C Others Human 人 FAM3C / ILEI 人細胞裂解液 (陽性對照) |
HA Others H5N1 甲型流感 H5N1 (A/chicken/India/NIV33487/2006) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 人細胞裂解液 (陽性對照) | NRBF2 Others Human 人 NRBF2 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) |
NCI-H292(人肺癌細胞) 5×106cells/瓶×2 甲型流感 H5N1 (A/bar-headed goose/Qinghai/1A/2005) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 人細胞裂解液 (陽性對照) | TIMP1 Others Mouse 小鼠 TIMP1 / TIMP / CLGI 人細胞裂解液 (陽性對照) |
RLFs, 大鼠肺成纖維細胞 | 人源NK原代細胞MMP-2/Gelatinase A(Human Matrix metalloproteinase 2/Gelatinase A) ELISA kit 人基質(zhì)金屬蛋白酶2/明膠酶AMulti-class antibodies規(guī)格： 48T |
L1210(小鼠白血病細胞) 5×106cells/瓶×2 小鼠 IL1RL1 / ST2 人細胞裂解液 (陽性對照) | 恒河猴腎細胞;LLC-MK2 |
IL21 Protein Human 重組人 Ierleukin-21 / IL-21 蛋白 | 非洲綠猴腎細胞系/HCV-E2;Vero-HCV-E2 人癌細胞，MCF-7細胞 SPC-A-1(肺腺癌細胞) |
EPCAM Others Cynomolgus 食蟹猴 EpCAM / OP-1 / TACSTD1 人細胞裂解液 (陽性對照) | Anti-Survivin/RBITC 紅色熒光素羅丹明標(biāo)記 Survivin 蛋白抗體(標(biāo)記抗體)Multi-class antibodies規(guī)格： 0.2ml |
OST-beta： 有機溶質(zhì)轉(zhuǎn)運蛋白OSTβ抗體 0.1ml | HCC1937(人癌細胞) 5×106cells/瓶×2 CL-0377LLC-WRC 256(大鼠腹水癌細胞)5×106cells/瓶×2 恒河猴腎細胞;LLC-MK2 |
Sox9a： 轉(zhuǎn)錄因子sox9a抗體 0.2ml | Cdc25B： 細胞分裂周期蛋白25B抗體 0.1ml |
Rhesus antibody Rh IgG/PE-CY5 PE-CY5標(biāo)記的驢抗豚鼠IgG 規(guī)格 0.1ml | ALOX15B Others Human 人 ALOX15B / 15 Lipoxygenase 2 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) |
1）復(fù)蘇細胞：將含有 1mL 細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘，棄去上清液，補 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜（或?qū)?細胞懸液加入 10cm 皿中，加入約 8ml 培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并 檢查細胞密度。
2）細胞傳代：如果細胞密度達 80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分 變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化。
3. 按 6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘，棄去上清液，補加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。下面 T25 瓶為類；
1. 細胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml ，細胞變圓 脫 落后，加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計數(shù)板計數(shù)。
人源NK原代細胞
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