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干細胞轉化試驗技術:形態學檢查法
閱讀:1450 發布時間:2018-5-29當機體受到抗原的刺激時,干細胞就可以轉化為淋巴母細胞,進一步轉化為致敏淋巴細胞。這種轉化在一定的程度上代表著機體的細胞免疫功能狀態。這種轉化也可在體外的T細胞的培養過程中加入適當的刺激原而出現,并表現出形態上的變化。目前常采用PHA誘發的淋巴細胞轉化試驗作為檢查機體細胞免疫的功能狀態。具體方法有形態學檢查法。
(一)操作方法
1. 于培養瓶內加0.2ml馬血,對照組與試驗組各做2瓶,試驗組均加PHA 30?g;
2.37℃培養72h,每天輕搖1~2次;
3.取出培養瓶,搖散血,倒入離心管,3 000r/min離心10min,去上清液;
4.用血球泥制備推片,晾干;
5.以瑞氏染液染2min~3min,加等量緩沖液,混勻繼續染3min,蒸餾水沖洗后再用姬姆薩染液染2min~3min。加等量緩沖染液感作7min~8min,餾水沖洗,晾干;
6.鏡檢,觀察,計數。
(二)注意事項
1.培養液zui適pH為7.2~7.4,過酸過堿都會影響細胞的生長而降低轉化率。培養液的類型與動物的白細胞有關,如小鼠的淋轉試驗,用RPMI-1640,用199液則不成功。
2.培養時間 以72h~120h轉化率zui高,超過這個時間,則轉化率反而下降。
3.吞噬細胞有時在形態上易與“過渡型"混淆。但巨噬細胞有其固有的特點,核占細胞比較小且偏一邊,核染色質濃集,細胞漿呈藍灰色或紅褐色,胞漿內有大小不等的顆粒或吞噬物,且含有大小不等的氣泡。
4.涂片要少蘸些細胞,推出尾部來,因淋巴細胞較大,易集中在尾部及邊緣。
5.觀察淋巴細胞轉化,染色不要太濃,以便觀察核仁。
6.嚴格的無菌操作,是干細胞轉化試驗成功的關鍵。
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