α-甘露糖苷酶（AMA）是一種催化甘露糖α形式裂解的酶。 α-甘露糖苷酶有助于在溶酶體中分解糖蛋白中的復雜糖類。缺陷或活性不足的AMA會導致α-甘露糖苷癥，并引起兒童中樞神經(jīng)系統(tǒng)的惡化。BioAssay Systems的非放射性、比色法AMA檢測基于從合成底物上裂解4-硝基苯酚。加入終止試劑后，硝基苯酚會呈現(xiàn)強烈的顏色。加入終止試劑后在405 nm處的吸光度增加與酶活性成正比。

作為BioAssay Systems在中國的區(qū)域總代理，艾美捷科技強烈推薦BioAssay Systems銷售產(chǎn)品α-甘露糖苷酶試劑盒。產(chǎn)品僅用于科研，不可用于臨床診斷。

主要特點

- 快速且靈敏。線性檢測范圍（10 ?L樣本）：10分鐘反應時間為1至250 U/L。

- 便捷且高通量。均質(zhì)“混合-孵育-測量"型檢測?？奢p松在高通量篩選液體處理系統(tǒng)上自動化操作，每天可處理數(shù)千個樣本。

應用

- 生物樣本（如血漿、血清、組織和培養(yǎng)基）中α-甘露糖苷酶活性的測定。

試劑盒組成（96孔板，100次檢測）

- 底物緩沖液：10 mL

- 終止試劑：12 mL

- 標準品：1 mL（12.5 mM硝基苯酚）

儲存條件

- 試劑盒在室溫下運輸。收到后將所有組分存于4°C。

- 保質(zhì)期：收到后6個月。

注意事項

- 試劑僅供研究使用。使用試劑時應遵循實驗室試劑的常規(guī)預防措施。請參閱材料安全數(shù)據(jù)表以獲取詳細信息。

操作程序

- 本檢測基于動力學反應。為確保孵育時間一致，向樣本中加入底物和終止試劑應迅速，混合應簡短但充分。建議使用多通道移液器。

樣本準備

- 血清和血漿可以直接檢測。

- 組織：解剖前，用磷酸鹽緩沖液（pH 7.4）沖洗組織以去除血液。將組織（50 mg）在約200 ?L含有50 mM磷酸鉀（pH 7.5）的緩沖液中勻漿。在4°C下以10,000 x g離心15分鐘。取上清液進行檢測。

- 細胞裂解液：通過在4°C下以2,000 x g離心5分鐘收集細胞。對于貼壁細胞，不要使用蛋白酶收獲細胞，而是使用橡膠刮刀。在適當體積的冷緩沖液中勻漿或超聲細胞，緩沖液中含有50 mM磷酸鉀（pH 7.5）。在4°C下以10,000 x g離心15分鐘。取上清液進行檢測。

- 所有樣本可在-80至-20°C下至少保存一個月。

試劑準備

- 將底物緩沖液平衡至所需反應溫度（例如25°C或37°C）。

反應準備

1. 將每個標準品（ODSTD）的100 ?L分別移至透明平底96孔板的孔中。

2. 將每個樣本的10 ?L分別移至不同的孔中。向每個樣本孔中加入90 ?L底物。輕拍板以混合。

3. 在25°C或所需溫度下孵育10分鐘。向每個孔中加入100 ?L終止試劑。輕拍板以混合。

4. 讀取405 nm處的吸光度（OD405nm）。

- 注意：如果您的樣本有顏色或不透明，則需要準備樣本空白（ODBLANK）。向一個孔中加入10 ?L樣本，并加入90 ?L去離子水。孵育后加入100 ?L終止試劑。

所需材料（但未提供）

- 移液裝置及配件（例如多通道移液器）、透明平底96孔板（例如VWR貨號82050-760）、離心管和酶標儀。

實例

文獻參考：

1. Rajesh, T et. al. (2013) Putative Role of a Streptomyces coelicolor-Derived α-Mannosidase in Deglycosylation and Antibiotic Production. Appl Biochem Biotechnol. [Epub ahead of print]

2. Nem?ovi?ová, I et. al. (2013) Characterization of Class I and II αMannosidases from Drosophila melanogaster. Glycoconj J. 30(9):899-909.

3. Rangarajan, M et. al. (2013) Characterization of the α- and β-Mannosidases of Porphyromonas gingivalis. J Bacteriol. 195(23):5297-307.

BioAssay Systems是一家位于美國北加州灣區(qū)的高新技術生物技術公司，專注于研發(fā)、生產(chǎn)和銷售高品質(zhì)的生化檢測試劑盒，產(chǎn)品種類齊全，主要用于科學研究和生物醫(yī)藥開發(fā)，以滿足生命科學行業(yè)日益增長的需求。BioAssay Systems在現(xiàn)代藥物發(fā)現(xiàn)領域擁有超過50年的豐富經(jīng)驗，已經(jīng)開發(fā)了超過250種用于藥物發(fā)現(xiàn)和生命科學研究的檢測試劑盒。產(chǎn)品主要包括：1.血液尿液化學；2.酶活性測定；3.能量代謝；4.氧化應激；5.高通量HTS試劑；6.陰陽離子檢測。

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