該產品可用于細胞和組織缺氧的免疫化學檢測，包括免疫熒光、免疫過氧化物酶法或流式細胞術。Hypoxyprobe?-1 RED ATTO 594試劑盒在福爾馬林固定、石蠟包埋的大鼠腫瘤組織中提供強有力的免疫染色，并且背景非常低。

規格

a. Hypoxyprobe?-1 RED ATTO 594試劑盒含有100 mg、200 mg或1000 mg的Hypoxyprobe?-1（噻米嗪鹽酸鹽）。通常在動物實驗中使用的劑量為60 mg/kg體重。

b. 每個試劑盒（100 mg和200 mg）含有一瓶，或者每個1000 mg試劑盒含有兩瓶，瓶中包含200微升稀釋后的RED ATTO 594染料結合的IgG1大鼠單克隆抗噻米嗪抗體（克隆號11.23.22.R）。每瓶含有200微升0.50 mg/ml的RED ATTO 594染料-MAb1溶液，溶液中含有1% BSA和0.09%疊D化鈉。RED ATTO 594染料-MAb1的最佳稀釋度由研究者自行確定，但發現1:50-100的稀釋比例在大鼠腫瘤組織中能產生強的免疫熒光染色。RED ATTO 594染料-MAb1專門設計用于免疫熒光，能夠在熒光顯微鏡下觀察，亦可用于流式細胞術和西方印跡應用。通常，在免疫熒光中的抗體稀釋度低于免疫過氧化物酶檢測系統中使用的稀釋度。

不包括的內容

未提供用于免疫組化分析的標準試劑。

作為Hypoxyprobe在中國的區域總代理，艾美捷科技強烈推薦Hypoxyprobe銷售產品【缺氧探針】ATTO 594。產品僅用于科研，不可用于臨床診斷。

缺氧探針?-1 RED ATTO 594試劑盒組件詳細描述：

缺氧探針?-1是一種取代的2-硝基咪唑，其化學名稱為鹽酸匹莫醇（pimonidazole hydrochloride），分子量為290.8；水溶性為400毫摩爾（116毫克/毫升）；在324納米波長下具有紫外線吸收（在0.9%生理鹽水中的消光系數為7020）。其游離堿性形式匹莫醇的分子量為254.3，pKa為8.7，辛醇-水分配系數為8.5。有關缺氧探針?-1的作用機制、固體缺氧探針?-1在室溫下避光儲存已達兩年，并在0.9%生理鹽水（100克/升）中于4°C儲存了4.5年而沒有發現降解（通過紫外光和高效液相色譜分析）。匹莫醇在缺氧細胞中被還原活化，并與蛋白質、肽和氨基酸中的巰基（硫氫基）形成穩定的加合物。RED ATTO 594染料-MAb1與這些加合物結合，從而實現其通過免疫化學方法的檢測。

RED ATTO 594染料-MAb1是一種與染料結合的鼠IgG1單克隆抗體（單克隆克隆4.3.11.3），其濃度為0.5毫克/毫升，溶解在含1% BSA和0.09%疊D化鈉作為穩定劑的PBS中。感興趣的組織可以通過免疫組化技術在冷凍固定切片或福爾馬林固定石蠟包埋切片上進行研究，或通過組織解離后的流式細胞術進行分析。注意：RED ATTO 594染料-MAb1與匹莫醇的蛋白質、肽和氨基酸加合物結合，但在免疫組化過程中，組織處理會洗去肽和氨基酸加合物，因此免疫組化檢測缺氧主要依賴于缺氧組織中匹莫醇的蛋白質加合物。

存儲

a. 在黑暗中室溫保存Hypoxyprobe?-1固體（也可在2-8°C的黑暗中保存）。

b. 在黑暗中將RED ATTO 594染料-MAb存放在2-8°C的溫度下。請勿冷凍。

檢測說明：

正常或腫瘤組織缺氧的研究開始于靜脈輸注、腹腔注射或口服攝入Hypoxyprobe?-1（哌莫地喹鹽酸鹽）溶液，劑量為60 mg/kg體重。對于一只25克的老鼠，這相當于1.5 mg/只。雖然在小鼠中使用高達400 mg/kg的劑量未觀察到明顯的毒性或組織缺氧變化，但60 mg/kg的劑量能以低成本提供良好的免疫染色效果。

Hypoxyprobe?-1在生理鹽水中的溶解度為116 mg/ml，因此可以使用非常小的體積來給藥。注射或攝入后，Hypoxyprobe?-1會分布到所有組織，包括大腦，但只有在氧氣濃度低于14微摩爾的細胞中，它才會與含硫蛋白質形成加合物——相當于37°C時的部分壓力pO2 = 10 mm Hg。除了腫瘤外，正常組織如肝臟、腎臟和皮膚中也存在pO2 = 10 mm Hg或更低的細胞，這些正常組織會結合Hypoxyprobe?-1。Hypoxyprobe?-1在小鼠中的血漿半衰期約為25分鐘。相比之下，老鼠的血漿半衰期為45分鐘，狗為90分鐘，人類為300分鐘。

在Hypoxyprobe?-1給藥后15到90分鐘內，可以收集感興趣的老鼠組織。在收集時，組織中的Hypoxyprobe?-1會在組織缺氧時結合，但與組織在15到90分鐘實驗中接觸的Hypoxyprobe?-1量相比，殘留的Hypoxyprobe?-1非常少，因此由于殘留的Hypoxyprobe?-1而造成的非特異性結合是不可檢測的。

除了動物研究外，Hypoxyprobe?試劑盒還可以用于細胞培養。通常，細胞懸液在100至200微摩爾的Hypoxyprobe?-1存在下，缺氧培養1到2小時。細胞通過細胞離心法收集，固定后用RED ATTO 594 MAb-1進行免疫染色。

建議的免疫染色方案：

使用FITC標記的抗哌莫地喹大鼠單克隆抗體，對福爾馬林固定的石蠟包埋組織切片中的哌莫地喹加合物進行免疫染色。

Hypoxyprobe, Inc.（缺氧探針公司）專注于研發非侵略性的缺氧標志物（Hypoxia maker）和缺氧依賴性的細胞因子，所有產品皆基于Pimonidazole核心結構來開發。 使用Pimonidazole HCl作為缺氧標記物，廣泛用在狗、大小鼠。缺氧探針試劑盒核心組分為：缺氧探針（Pimonidazole 或CCI-103F）和缺氧探針的抗體。不同試劑盒中的探針和抗體標記不同（可應用于免疫熒光（IF），免疫組化（IHC），WB或流式細胞分析（FC））

艾美捷科技是Hypoxyprobe的中國代理商，為科研工作者提供優質的產品與服務。

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