觸珠蛋白檢測試劑盒是一種高靈敏度的雙位點酶聯免疫測定法（ELISA），用于豬血清和血漿中觸珠蛋白的測定。僅供研究使用。不是為了用于診斷程序。

作為ALPCO在中國的區域總代理，艾美捷科技強烈推薦ALPCO銷售產品豬結合珠蛋白ELISA。產品僅用于科研，不可用于臨床診斷。

小鼠觸珠蛋白ELISA檢測原理：

如圖1所示，在這種測定中，樣品中的觸珠蛋白與已吸附在聚苯乙烯微孔板表面的抗觸珠蛋白抗體發生反應。通過洗滌去除未結合的蛋白質后，加入與辣根過氧化物酶（HRP）偶聯的抗觸珠蛋白抗體。這些酶標記的抗體與之前結合的觸珠蛋白形成復合物。經過另一次洗滌步驟后，通過添加顯色底物3,3',5,5'-四甲基聯苯胺（TMB）來測定結合的酶。結合的酶量與測試樣品中觸珠蛋白的濃度成正比；因此，450納米處的吸光度是測試樣品中觸珠蛋白濃度的量度。測試樣品中觸珠蛋白的量可以從標準曲線中插值得出，并根據樣品稀釋進行校正。

所需材料但未提供

精密移液器（2微升至1000微升），用于制備和分配稀釋液

試管

微孔板洗滌器/抽吸器

蒸餾水或去離子水

微孔板讀取器

用于制備試劑和緩沖溶液的各種玻璃器皿

計時器

離心機

抗凝劑（血漿樣品）

樣品收集和處理

所有血液成分和生物材料應視為潛在危險。處理和處置時遵循通用預防措施。如果血液樣品出現凝塊、明顯溶血、脂血，或樣品的完整性存在問題，請做好記錄并謹慎解釋結果。下列樣品收集和儲存條件僅供參考。未評估樣品的穩定性。

血清樣品 - 應通過靜脈采血。血凝塊形成后，通過離心分離血清。移除血清并立即進行測定，或分裝后儲存于-80°C（最好）或-20°C。避免反復凍融循環。

血漿樣品 - 應將血液收集到含有抗凝劑的容器中，然后進行離心。立即進行測定或分裝后儲存于-80°C（最好）或-20°C。避免反復凍融循環。

已知干擾物質 - 濃度高于0.1%的疊氮化物和硫柳汞會抑制酶反應。

樣品稀釋

測定要求每個測試樣品在使用前進行稀釋。每次進行測定時，所有樣品都應進行雙重測定。推薦的稀釋比例僅供參考。稀釋比例應基于未知樣品的預期濃度，以使稀釋后的樣品落在標準曲線的動態范圍內。如果不確定樣品水平，在運行整個板之前，強烈建議對一個或兩個代表性樣品進行系列稀釋。

血清和血漿樣品 - 建議的起始稀釋比例為1:10,000。要制備1:10,000的樣品稀釋液，將5微升的樣品轉移到495微升的1X稀釋液中。這會產生1:100的稀釋液。接下來，將1:100的稀釋液再稀釋，將5微升轉移到495微升的1X稀釋液中。這會產生1:10,000的稀釋液。每個階段都要c底混合。

試劑準備

稀釋液濃縮液 - 提供的稀釋液為5倍濃縮液，必須用蒸餾水或去離子水（1份緩沖液濃縮液，4份去離子水）稀釋1:5。

洗滌液濃縮液 - 提供的洗滌液為20倍濃縮液，必須用蒸餾水或去離子水（1份緩沖液濃縮液，19份去離子水）稀釋1:20。濃縮液在儲存溫度較低時可能會形成晶體。稀釋前將濃縮液加熱至30-35°C可以溶解晶體。

酶抗體結合物 - 通過向每個微孔板測試條添加10微升酶抗體結合物至990微升1X稀釋液中，計算每個微孔板測試條所需的工作結合物溶液量。均勻但輕柔地混合。避免起泡。

預包被ELISA微孔板 - 按提供狀態直接使用。揭開鋁箔袋，從袋中取出板。取出在測定中不會使用的所有條和孔，放回袋中并重新密封，同時放入干燥劑。

豬觸珠蛋白校準液 - 根據批次特定的分析證明進行準備。

結果計算

從每個孔的值中減去平均背景值（標準零的平均吸光度讀數）。

對每個標準的平均重復讀數進行平均，并使用結果構建標準曲線。通過使用能夠生成四參數邏輯曲線擬合的計算機軟件來減少數據，構建標準曲線。也可以使用二階多項式（二次）或其他曲線擬合；然而，它們對數據的擬合將不夠精確。

從標準曲線中插值樣品值。校正稀釋因子，以得到原始樣品中觸珠蛋白的濃度。

附錄A - 參考血清信息

此試劑盒中包含一瓶參考血清。請參閱隨附的產品概況表以獲取批次特定信息。請注意以下事項：

收到參考血清后應立即冷凍。如果儲存得當，直到過期日期前都是穩定的。

參考血清應適當稀釋，以適應標準曲線范圍。請參閱協議中的“樣品稀釋"部分以獲取說明。

在移液樣品（程序部分）時，也應雙重移液參考血清。

ALPCO產品種類多樣，可測樣品來源包括人、大/小鼠、豚鼠、兔、豬、羊、狗、猴等，涉及神經生物學、骨代謝、心血管疾病和氧化應激、細胞因子與信號轉導、糖尿病和肥胖癥、內分泌學、甲狀腺功能、腸胃病學、免疫學、生殖激素、抗體和抗原、分子診斷等多個研究領域，尤以糖尿病和肥胖癥研究領域見長。

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