總膽固醇（TC）包括游離膽固醇和膽固醇酯。組織中的總膽固醇是指組織中所有脂蛋白中所含的膽固醇的總和。EZMeta™總膽固醇（TC）比色法檢測試劑盒提供了一種簡單的方法，用于檢測血清、血漿、動物組織、細胞和細菌等多種生物樣品中的TC濃度。在檢測過程中，酯酶催化膽固醇酯的水解，產生游離膽固醇（FC）和游離脂肪酸（FFA）。然后，膽固醇氧化酶催化FC產生Δ4-膽甾酮和H2O2。進一步，H2O2、4-氨基苯酚和苯酚過氧化物酶可以催化生成具有特征吸收峰位于500 nm處的紅色醌化合物，其顏色深淺與TC含量成正比。

艾美捷 總膽固醇 (TC) 檢測試劑盒：

貨號：D-AKC2220

規格：48T / 96T

儲存條件：儲存于4°C，避光，保存時間為12個月

適用樣品：血清、血漿、動物組織、細胞、細菌

所需材料但不提供：

·能夠測量500 nm處吸光度的微孔板讀板儀或可見光分光光度計

·96孔板或微玻璃比色皿，精密移液器，一次性移液頭

·冰制冰機，冷藏離心機，水浴

·無水乙醇 ·勻漿器（用于組織樣品）

總膽固醇 (TC) 檢測試劑盒試劑準備：

TC工作溶液：按照提供的使用方法直接使用。使用前將其平衡至37°C。儲存在4°C。

標準品：按照提供的使用方法直接使用。使用前將其平衡至室溫。儲存在4°C，避光。

標準曲線設置：將2 µmol/mL的標準品用無水乙醇稀釋至下表所示的1、0.5、0.25、0.125、0.063、0.031 µmoL/mL。

總膽固醇 (TC) 檢測試劑盒樣品準備：

注意：推薦使用新鮮樣品。若不能立即測定，樣品可以在-80°C下儲存一個月。

1. 動物組織：稱取約0.1克組織，加入1 mL無水乙醇。在冰上均質化。以8,000 g的速度離心10分鐘，溫度為4°C。使用上清液進行測定，并將其放在冰上待測。

2. 細胞或細菌：收集5×10^6個細胞或細菌放入離心管中，在離心后棄去上清液；加入1 mL無水乙醇，在冰浴中超聲處理細胞或細菌5分鐘（功率20%或200 W，超聲3秒，間隔7秒，重復30次）。以8,000 g的速度離心10分鐘，溫度為4°C。使用上清液進行測定，并將其放在冰上待測。

3. 血清（血漿）樣品：直接進行測試。注意：如果通過蛋白質濃度計算含量，最好使用EZMeta™總膽固醇（TC）比色測定試劑盒對總蛋白質進行定量。

總膽固醇 (TC) 檢測試劑盒典型數據：

注意：計算公式，包括推導過程和最終公式。這兩個公式完-全相等。建議使用粗體的簡潔計算公式作為最終公式。

1. 繪制標準曲線

以標準溶液濃度為縱坐標，ΔA標準為橫坐標，繪制標準曲線。將ΔA待測值代入方程得到y值（µmoL/mL）。

2. 計算樣品中的TC含量

（1）根據樣品的新鮮重量

TC（μmol/g）= y ÷（W÷V提取）× n = y ÷ W × n

（2）根據蛋白質濃度計算

TC（μmol/mg蛋白）= y ÷ Cpr × n

（3）根據細胞或細菌數量計算

TC（μmol/10^4）= y ÷（細胞或細菌數量÷V提取）× n = y ÷ 500 × n

（4）根據液體體積計算

TC（μmol/mL）= y × n

其中：W：樣品重量，克；V提取：添加的無水乙醇體積，1 mL；n：稀釋倍數；Cpr：上清液蛋白質濃度，mg/mL；500：細胞或細菌的總數，5×10^6。

該試劑僅用于科學研究領域，不適用于臨床診斷或其他用途