艾美捷 Abbexa Plasmid MiniPrep Kit 提供了一種從≤20 ml (LB) 或 ≤4 ml 細菌細胞培養物中分離高質量質粒 DNA 的有效方法，DNA 產量高達 40 µg。*配制的裂解緩沖液和中和緩沖液允許無差錯視覺識別完整的細菌細胞裂解和中和。純化的質粒 DNA 適用于多種分子生物學應用，包括限制性內切酶消化、連接、轉化、DNA 測序和轉染。

艾美捷Abbexa 質粒 MiniPrep 試劑盒套件內容：

零件 50 次 200 次

重懸緩沖液 (RB) 15 毫升 60 毫升

裂解緩沖液 (LB) 15 毫升 60 毫升

中和緩沖液 (RB) 20 毫升 80 毫升

洗滌緩沖液 (WB) 10 毫升 2 × 20 毫升

洗脫緩沖液 (EB) 5毫升 10 毫升

核糖核酸酶 A (10 毫克/毫升) 150 微升 600 微升

帶收集管的小型質粒離心柱 50 2×100

艾美捷Abbexa 質粒 MiniPrep 試劑盒檢測程序：

1、通過將整個 RNase 小瓶添加到重懸緩沖液瓶中來制備工作重懸緩沖液。充分混合并儲存在 2-8 °C 之間。

2、通過向每個洗滌緩沖液瓶中加入 100% 乙醇來制備工作洗滌緩沖液：40 ml (50 rxns)；或 2 × 80 ml (200 rxns)。攪拌均勻。

3、將過夜培養的細菌懸浮液添加到微量離心管中。測量 LB 培養基體積并記下下表中所需的試劑體積。

LB培養基 工作重懸緩沖液  裂解緩沖液  中和緩沖液

≤ 5 毫升 250 微升 250 微升 350 微升

5-10毫升 500 微升 500 微升 700 微升

10-15 毫升  750 微升  750 微升  1050 微升

15-50 毫升  1000 微升  1000 微升  1400 微升

4、以 10,000 × g 離心 1 分鐘。棄去上清液。

5、根據上表，將適量的工作重懸緩沖液（與 RNase A 預混合）添加到細胞沉淀中，并通過移液器將其*重懸。

6、根據上表添加適量的裂解緩沖液（藍色液體）。將試管倒置 4-6 次，立即*混合。裂解液應從不透明變為亮藍色。

7、在完成第 6 步后的 5 分鐘內，根據上表添加適量的中和緩沖液（黃色液體）。通過顛倒試管 4-6 次*混合。中和完成后，裂解液將變為黃色，并形成淡黃色沉淀。讓裂解物在室溫下靜置 2 分鐘。

8、以 12,000 × g 離心 5 分鐘。將上清液轉移到離心柱中。

9、以 12,000 × g 離心 1 分鐘。丟棄流過。

10、向柱中加入 650 µl 工作洗滌緩沖液（加乙醇），然后以 12,000 × g 離心 1 分鐘。丟棄流過。

11、將空柱以 12,000 × g 離心 1-2 分鐘，以*去除任何殘留的洗滌緩沖液。

12、將離心柱放入干凈的微量離心管中，然后將 30-100 µl 洗脫緩沖液或無菌蒸餾水 (pH > 7.0) 直接添加到柱基質的中心。為獲得更高的產量，請將洗脫緩沖液或水預熱至 65 °C）。讓色譜柱在室溫下靜置 1 分鐘。以 10,000 × g 離心柱 1 分鐘以洗脫 DNA。分離的質粒 DNA 可以立即使用，也可以儲存在-20°C。

注：

1、在室溫下進行所有離心步驟。

2、使用前，請檢查 Lysis Buffer 溶液是否混濁。如果渾濁，將瓶子在設置為 37 °C 的水浴中加熱，以確保所有內容物都*溶解。使用后立即擰緊瓶蓋以避免 pH 值變化。

3、該試劑盒的zui 大 DNA 產量為 40 µg。如果質粒 DNA 產量低，增加細菌培養量。

4、使用上述建議的工作重懸緩沖液、裂解緩沖液和中和緩沖液的體積，因為過多的細胞培養會導致不*裂解，從而影響質粒 DNA 的產量和純度。

5、5 ml LB 培養基相當于 1 次 rxn。

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