羥脯氨酸（（2S，4R）-4-羥脯氨酸，Hyp）是由脯氨酰-4-羥化酶形成的非蛋白源性氨基酸，其催化蛋白質(zhì)合成后多肽脯氨酸殘基的翻譯后修飾。在動(dòng)物體內(nèi)發(fā)現(xiàn)羥脯氨酸幾乎全部由膠原蛋白組成，其中含有約12-14%的羥脯氨酸（纖維蛋白彈性蛋白也含有少量羥脯氨酸含量）。因此，組織水解物中的羥脯氨酸可直接測(cè)量膠原蛋白的含量。

膠原蛋白是哺乳動(dòng)物和許多疾病中zui豐富的蛋白質(zhì)被認(rèn)為會(huì)影響膠原蛋白的轉(zhuǎn)化，包括腫瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移轉(zhuǎn)移、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、心肺纖維化和肌營(yíng)養(yǎng)不良。經(jīng)典的Hyp測(cè)定方法是基于將Hyp氧化成吡咯中間體，然后與溶解在濃高氯酸中的埃利希試劑反應(yīng)（HClO4）。高氯酸是一種有毒和高活性的有害物質(zhì)，需要特殊處理和廢物處理協(xié)議。

艾美捷 BioVision羥脯氨酸檢測(cè)試劑盒（不含高氯酸鹽）使用專有的酸性顯影液較精確測(cè)量Hyp不使用有害高氯酸鹽的組織和蛋白質(zhì)/肽酶水解物。這是一個(gè)快速方便的協(xié)議，產(chǎn)生了顏色鮮艷的發(fā)色團(tuán)，吸收峰為560nm。該檢測(cè)法可檢測(cè)到至少0.05µg羥脯氨酸，每孔含0.05µg羥脯氨酸一個(gè)96孔的格式，并產(chǎn)生比色結(jié)果，幾乎是相同的經(jīng)典高氯酸為基礎(chǔ)的方法。

艾美捷 BioVision羥脯氨酸檢測(cè)試劑盒組分：

氧化緩沖液10毫升WM K226-100-1

氯胺T濃縮液600µl紅色K226-100-2

顯影液5毫升NM K226-100-3

DMAB濃縮液（DMSO）5 ml琥珀色K226-100-4

羥脯氨酸標(biāo)準(zhǔn)品（1 mg/ml）100µl黃色K226-100-5

微孔板密封膜1膜─ K226-100-6

該羥脯氨酸檢測(cè)試劑盒相關(guān)試劑和設(shè)備：

1、基于微板的多壁分光光度計(jì)

2、用平底清理96孔板

3、10N氫氧化鈉（NaOH）和10N鹽酸（HCl）

4、水解用：聚丙烯小瓶（BV類別號(hào)M1352）和螺帽（BV類別號(hào)M1353）

圖：（a）羥脯氨酸標(biāo)準(zhǔn)曲線。（b） 羥脯氨酸標(biāo)準(zhǔn)曲線吸光度值之間的相關(guān)性經(jīng)典的基于高氯酸的分析試劑盒（Cat#K555）和無(wú)高氯酸鹽分析。這兩種檢測(cè)方法顯示出良好的相關(guān)性（R）2.> 0.999). 一個(gè)平淡的Altman圖表明兩次分析之間高度一致，平均差異僅為3.06±各方法產(chǎn)生的吸光度值之間的0.33%。（c） 大鼠組織中總羥脯氨酸含量的估算。老鼠腿部肌肉、脾臟、心臟和肺樣品用dH2O均質(zhì)，在120°C下用10N NaOH水解1小時(shí)，并用10N鹽酸中和。對(duì)于每個(gè)樣品，測(cè)定10μlzui終中和水解物。羥脯氨酸水平（按μg羥脯氨酸/mg濕組織）的含量：肌肉為1.71±0.09μg/mg，脾臟為0.47±0.07μg/mg，脾臟為0.56±0.10μg/mg心臟為1.56±0.17μg/mg，肺為1.56±0.17μg/mg。數(shù)據(jù)為3-4個(gè)重復(fù)的平均值±SEM，根據(jù)試劑盒方案進(jìn)行分析。