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石蠟切片免疫組化實驗步驟1、 石蠟切片脫蠟至水：依次將切片放入二甲苯Ⅰ15min-二甲苯Ⅱ15min-無水乙醇Ⅰ5min-無水乙醇Ⅱ5min-85%酒精5min-75%酒精5min-蒸餾水洗。2、 抗原修復：組織切片置于盛滿EDTA抗原修復緩沖液（PH9.0）的修復盒中于微波爐內進行抗原修復，中火8min至沸，停火8min保溫再轉中低火7min，此過程中應防止緩沖液過度蒸發，切勿干片。自然冷卻后將玻片置于PBS（PH7.4）中在脫色搖床上晃動洗滌3次，每次5min。3、 阻斷內源性過氧化物酶：切片放入3%過氧化氫溶液（雙氧水：純水=1:9），室溫避光孵育25 min，將玻片置于PBS（PH7.4）中在脫色搖床上晃動洗滌3次，每次5min。4、 BSA或者血清封閉:切片稍甩干后用組化筆在組織周圍畫圈（防止抗體流走），在圈內滴加用3%BSA或者10%正常兔血清均勻覆蓋組織，室溫封閉30min。（一抗是山羊來源用10%正常兔血清封閉，一抗其它來源的用3%BSA封閉）5、 加一抗：輕輕甩掉封閉液，在切片上滴加PBS按一定比例配好的一抗，切片平放于濕盒內4°C孵育過夜。（濕盒內加少量水防止抗體蒸發）6、 加二抗：玻片置于PBS（PH7.4）中在脫色搖床上晃動洗滌3次，每次5min。切片稍甩干后在圈內滴加與一抗相應種屬的二抗（HRP標記）覆蓋組織，室溫孵育50min。7、 DAB顯色：玻片置于PBS（PH7.4）中在脫色搖床上晃動洗滌3次，每次5min。切片稍甩干后在圈內滴加新鮮配制的DAB顯色液，顯微鏡下控制顯色時間，陽性為棕黃色，自來水沖洗切片終止顯色。8、 復染細胞核：Harris蘇木素復染3min左右，自來水洗，1%的鹽酸酒精分化數秒，自來水沖洗，氨水返藍，流水沖洗。9、 脫水封片：將切片依次放入75%酒精6min-85%酒精6min --無水乙醇Ⅰ6min -無水乙醇Ⅱ6min -二甲苯Ⅰ5min 中脫水透明，將切片從二甲苯拿出來稍晾干，中性樹膠封片。10、 顯微鏡鏡檢，圖像采集分析。