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生物素和ELISA系統關系

2017-10-9  閱讀(1965)

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生物素親和素(又稱抗生物素)系統(biotinavidin system,BAS)標記抗體的技術是20世紀70年代后期發展起來的一種新的免疫檢測方法。由于親和素與生物素間的親和力*,結合迅速,且極其穩定,生物素標記抗體和酶的標記率高,又不影響蛋白的活性,使BAS標記技術比常規酶聯免疫、放射免疫及熒光免疫技術有著更高的靈敏度,為微量抗原、抗體的檢測開辟了新的途徑。目前生物素和親和素(近年來,在BAS檢測中多用鏈霉親和素“streptavidin,SA”,它是鏈霉菌培養過程中的分泌物,完整的鏈霉親和素和從卵白中提取的親和素一樣,也由4條相同的肽鏈組成。因鏈霉親和素在檢測應用中發生的非特異性結合遠較親和素低,因此日漸受重視,已有取代親和素之勢。

各種抗體或酶的標記物在國內已有商品供應,使用方便。BAS ELISA具有的特點:

①對于所有的抗原抗體系統,包括免疫細胞化學、ELISA、免疫印跡法等都適用,應用范圍極廣;

②BAS在溫和條件下可與各類生物大分子如蛋白質、脂多糖等結合,并且這種結合對原生物大分子的生物活性無影響;

③每個親和素分子可與4個生物素分子結合,所以可以偶合更多連接生物素的酶分子,從而大大提高了靈敏度;

④生物素和親和素間親和力強,故二者一旦結合,就極為穩定,不受在ELISA方法中的保溫及多次洗滌影響,而且這種結合反應時間比抗原抗體反應所需時間短;

⑤結果專一性強,非特異性顯色或染色背景極低;

⑥*抗體稀釋度高,可節約抗體。

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原理

生物素或親和素與抗體分子或標記物結合后,既不影響前者的親和力,也不改變后者的特性。親和素分子的4個活性部位并非都和連接在抗體分子上的生物素殘基結合,剩下的游離部位尚可作為另一種生物素標記蛋白質的受體。這些特點就是BAS免疫標記技術的基礎和原理。

BAS基本檢測方法可分為兩大類,一類以游離親和素居中,分別連接生物素化大分子反應體系和標記生物素,稱為BAB法或橋聯親和素生物素法(bridged avidin biotintechnique,BRAB),其改良法稱為(avidinbiotin complex,ABC)法。另一類以標記親和素連接生物素化大分子反應體系,稱為BA法或標記親和素和生物素法(LAB)。現分別介紹如下:

1.BA法亦稱LBA法。系將特異性抗體生物素化,將酶分子標記在親和素分子上,生物素化抗體與被檢抗原結合后,再借BAS的高度親和力將酶分子聯結到抗原分子上,經酶促反應即可檢出抗原。

2.BAB法亦稱BRAB法。系將特異性抗體生物素化,將酶分子標在生物素上,然后以游離親和素橋聯物,使被檢抗原、生物素化抗體和酶標生物素聯成一體。

3.ABC法原理與BAB法基本相同,只是親和素和酶標生物素需要先按一定比例形成ABC復合物,這種網絡結構結合了大量的酶分子,當親和素尚未被酶標生物素飽和時,生物素化抗體即可與之結合。BASELISA的三種基本檢測法。

上述方法中,如將第二抗體生物素化,即為間接法。由于間接法增加了一級抗原抗體反應,因而比直接法更敏感,應用范圍更廣。近年來許多學者對上述基本方法進行了改良,有人用親和素抗體或A蛋白作橋聯物。另外還發展了BAELISA競爭法和抑制法等。

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