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豬白細胞介素1(il-1)ELISA定量檢測方法-上海仁捷

2017-7-5  閱讀(1983)

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試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯免疫吸附試驗(ELISA)。往預先包豬白細胞介素1IL-1)捕獲抗體的包被微孔中,依次加入標本、標準品、HRP標記的檢測抗體,經過溫育并*洗滌。用底物TMB顯色,TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的豬白細胞介素1IL-1)呈正相關。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度(OD 值),計算樣品濃度。

操作步驟

  1.   從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條,剩余板條用自封袋密封放回4℃。
  2.   設置標準品孔和樣本孔,標準品孔各加不同濃度的標準品50μL;
  3.   樣本孔待測樣本50μL;空白孔不加。
  4.   除空白孔外,標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶(HRP)標記的檢測抗體100μL,用封板膜封住反應孔,37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。
  5.   棄去液體,吸水紙上拍干,每孔加滿洗滌液(350μL,靜置1min,甩去洗滌液,吸水紙上拍干,如此重復洗板5次(也可用洗板機洗板)。
  6.   每孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min。
  7.   每孔加入終止液50μL,15min內,在450nm波長處測定各孔的OD值。

實驗結果計算

所測標準品的OD值為橫坐標,標準品的濃度值為縱坐標,在坐標紙上或用相關軟件繪制標準曲線,并得到直線回歸方程將樣品的OD值代入方程,計算出樣品濃度

試劑盒性能

  •  檢測范圍5 pg/mL  160 pg/mL
  •  靈敏度:zui低檢測濃度小于1.0 pg/mL
  •  特異性:不與其它可溶性結構類似物交叉反應。
  •  重復性:板內變異系數小于10% ,板間變異系數小于15% 

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