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糖原合成酶(GCS)測試盒微量法

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具體成交價以合同協議為準
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  • 所在地

    上海市

規格
100管/96樣1140元15 盒 可售
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更新時間:2025-03-04 12:49:43瀏覽次數:296

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產品簡介

供貨周期 現貨 規格 100管/96樣
貨號 GOY-SH300 應用領域 生物產業
主要用途 僅供科研研究實驗 檢測方法 微量法
產品類別 糖原系列 品牌 谷研
貨期 現貨    
糖原合成酶(GCS)測試盒微量法公司正在出售的產品:煙曲霉PCR檢測試劑盒Aspergillus fumigatusPCR構巢曲霉PCR檢測試劑盒Aspergillus nidulansPCR赭曲霉PCR檢測試劑盒Aspergillus ochraceusPCR寄生曲霉PCR檢測試劑盒Aspergillus parasiticusPCR

詳細介紹

糖原合成酶(GCS)測試盒微量法

糖原合成酶(GCS)測試盒微量法

本公司所有產品僅供科學實驗,不做其他科學實驗外的使用!
商品屬性:
糖原合成酶(GCS)測試盒微量法

貨號

GOY-SH300

檢測方法

微量法

規格

100管/96樣

產品類別

糖原系列

測定意義:

糖原合成酶(GCS)測試盒微量法

GCS(EC 2.4.1.11)催化UDPG和葡萄糖殘基生成糖原和UTP,以α-1,4-糖苷鍵相連延長糖鏈,是肝和肌肉糖原合成酶的限速酶,是胰島素作用的主要靶酶,對糖代謝的調節和血糖穩態的維持具有重要作用。

測定原理:

GCS催化UDPG和葡萄糖殘基生成糖原和UTP,丙酮酸激酶和乳酸脫氫酶進一步依次催化NADH氧化生成NAD+,在340nm下測定NADH下降速率,即可反映GCS活性。

需自備的儀器和用品:

分光光度計/酶標儀、臺式離心機、可調式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰和蒸餾水。

試劑的組成和配制:

提取液一:液體 100mL×1 瓶,4℃保存。

提取液二:液體 100mL×1 瓶,4℃保存。

試劑一:粉劑×1 瓶,-20℃保存;

試劑二:液體 20mL×1 瓶,4℃保存;

試劑三:液體 14uL×1 支,4℃保存;

組織樣本的前處

①總 GAPDH 酶提取:建議稱取約 0.1g 樣本,加入 1mL 提取液一,冰浴勻漿后超聲破碎(冰浴,200W,破碎 3s,間歇 7s,總時間 1min),然后 4℃,8000g 離心 10min,取上清測定。

②胞漿和葉綠體 GAPDH 酶的分離:按照植物組織質量(g):提取液體積(mL)為 1:5~10的比例(建議稱取約 0.1g 樣本,加入 1mL 提取液一),冰浴勻漿后于 4℃,200g 離心 5min,棄沉淀,取上清4℃,8000g 離心 10min,取上清用于測定胞漿 GAPDH 酶活性,取沉淀加 1mL 提取液二,震蕩溶解后超聲破碎(冰浴,200W,破碎 3s,間歇 7s,總時間 1min),然后 4℃,8000g 離心 10min,取清測定葉綠體中 GAPDH 酶活性。建議測定總 GAPDH 酶活性,按照步驟①提取粗酶液,若需要分別測定胞漿和葉綠體中的GAPDH,則按照步驟②提取粗酶液。細菌或培養細胞的前處理先收集細菌或細胞到離心管內,離心后棄上清;按照細菌或細胞數量(104個):提取液一體積(mL)為 500~1000:1 的比例(建議 500 萬細菌或細胞加入 1mL 提取液一),超聲波破碎細菌或細胞(冰浴,功率 20%或 200W,超聲 3s,間隔 10s,重復 30 次);8000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測。

糖原合成酶(GCS)測試盒微量法

測定步驟:
糖原合成酶(GCS)測試盒微量法

1、 分光光度計或酶標儀預熱 30min 以上,調節波長至 340nm,蒸餾水調零。

2、 樣本測定

(1)工作液的配制:將試劑二全部倒入試劑一瓶中,充分溶解,37℃(哺乳動物)或 25℃(其它物種)預熱 10 分鐘;用不完的試劑分裝后-20℃保存,禁止反復凍融。

(2)在試劑三中加入 500μL 蒸餾水,充分混勻待用;用不完的試劑分裝后-20℃保存,禁止反復凍融。

(3)在微量石英比色皿或 96 孔板中加入 5μL 樣本、5μL 試劑三和 190μL 工作液,混勻,加入最后一個試劑的同時開始計時,記錄 340nm 處 20s 時的吸光值 A1 和 5min20s 后的吸光值 A2,計算 ΔA=A1-A2。

GAPDH 活性計算

a.用微量石英比色皿測定的計算公式如下

(1)按樣本蛋白濃度計算

單位的定義:每 mg 組織蛋白每分鐘消耗 1 nmol 的 NADH 定義為一個酶活力單位。GAPDH(nmol/min/mg prot)=[ΔA×V 反總÷(ε×d)×109]÷(V 樣×Cpr) ÷T=1286×ΔA÷Cpr

(2)按樣本鮮重計算

單位的定義:每 g 組織每分鐘消耗 1 nmol 的 NADH 定義為一個酶活力單位。GAPDH(nmol/min/g 鮮重)=[ΔA×V 反總÷(ε×d)×109]÷(W ×V 樣÷V 樣總) ÷T=1286×ΔA÷W

(3)按細菌或細胞密度計算

單位的定義:每一萬個細菌或細胞每分鐘消耗 1 nmol 的 NADH 定義為一個酶活力單位。GAPDH(nmol/min/104cell)=[ΔA×V 反總÷(ε×d)×109]÷(500 ×V 樣÷V 樣總) ÷T=2.572×ΔA

V 反總:反應體系總體積,2×10-4L;ε:NADH 摩爾消光系數,6.22×103L / mol /cm;d:比色皿光徑,1cm;V 樣:加入樣本體積,0.005 mL;V 樣總:加入提取液體積,1 mL;T:反應時間,5 min;Cpr:樣本蛋白質濃度,mg/mL;W:樣本質量,g;500:細菌或細胞總數,500 萬。

b.用 96 孔板測定的計算公式如下

(1)按樣本蛋白濃度計算

單位的定義:每 mg 組織蛋白每分鐘消耗 1 nmol 的 NADH 定義為一個酶活力單位。GAPDH(nmol/min/mg prot)=[ΔA×V 反總÷(ε×d)×109]÷(V 樣×Cpr) ÷T=2572×ΔA÷Cpr

(2)按樣本鮮重計算

單位的定義:每 g 組織每分鐘消耗 1 nmol 的 NADH 定義為一個酶活力單位。GAPDH(nmol/min/g 鮮重)=[ΔA×V 反總÷(ε×d)×109]÷(W ×V 樣÷V 樣總) ÷T=2572×ΔA÷W

(3)按細菌或細胞密度計算

單位的定義:每一萬個細菌或細胞每分鐘消耗 1 nmol 的 NADH 定義為一個酶活力單位。GAPDH(nmol/min/104cell)=[ΔA×V 反總÷(ε×d)×109]÷(500 ×V 樣÷V 樣總) ÷T=5.144×ΔA

V 反總:反應體系總體積,2×10-4L;ε:NADH 摩爾消光系數,6.22×103L / mol /cm;d:96 孔板光徑,0.5cm;V 樣:加入樣本體積,0.005 mL;V 樣總:加入提取液體積,1 mL;T:反應時間,5 min;Cpr:樣本蛋白質濃度,mg/mL;W:樣本質量,g;500:細菌或細胞總數,500 萬。

生化試劑盒的使用注意事項:
糖原合成酶(GCS)測試盒微量法

選擇合適的試劑盒:根據實驗目的和檢測對象選擇合適的試劑盒,確保實驗的準確性和可靠性。

嚴格遵循說明書:按照試劑盒的說明書進行操作,避免誤用或浪費。

注意保存條件:按照試劑盒的保存條件進行妥善保存,避免陽光直射、高溫或潮濕等不利因素。

控制實驗條件:在實驗過程中嚴格控制實驗條件,如溫度、時間、pH值等,以確保實驗結果的穩定性。

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糖原合成酶(GCS)測試盒微量法

1、訂購前,請與銷售員核對產品中文名稱/CAS號/英文名稱等。

2、我司大部分產品都是現貨,產品核實好下單后即可當天發貨。(庫存信息以當日為準)如有特殊要求請在發貨前與銷售員聯系。

3、我司產品支持款到發貨、快遞代收尾款、網上現拍等付款方式。

4、質量保證,嚴格把關,如有產品異議經公司鑒定確認后可包換包退,免除客戶后顧之憂。

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