詳細介紹
正式測定前務必取 2-3 個預期差異較大的樣本做預測定
商品屬性:
產品名稱 | 規格 | 100管/96樣 | |
檢測方法 | 微量法 | 貨號 | GOY-SH421 |
產品分類 | 氧化與抗氧化系列 | 用途 | 僅供科研實驗 |
測定意義:
脂質過氧化是動植物體內活性氧(ROS)氧化生物膜的過程,脂質過氧化物(LPO)是脂質過氧化過程的產物,即ROS與生物膜的磷脂、酶和膜受體相關的多不飽和脂肪酸的側鏈及核酸等大分子物質起脂質過氧化反應形成LPO,使細胞膜的流動性和通透性發生改變,最終導致細胞結構和功能的改變。因此,LPO常被作為機體氧化應激的一種指標,與某些疾病的病理過程,如腫瘤、化學中毒、感染、炎 癥、自身免疫疾病、動脈粥樣硬化(AS)及心腦血管疾病,以及衰老等生理過程密切相關。
測定原理:
LPO在酸性條件下加熱,產生小分子終產物MDA,MDA與硫代巴比酸(thiobarbituric acid,TBA)縮合,生成紅色產物,在535nm有最大吸收峰。
需自備的儀器和用品:
酶標儀、水浴鍋、臺式離心機、可調式移液器、96孔板、研缽、冰和蒸餾水。
試劑的組成和配制:
提取液一:液體 25mL×1 瓶,4℃保存。
提取液二:液體 25mL×1 瓶,4℃保存。
試劑一:粉劑×1 瓶,-20℃保存;
試劑二:液體 25mL×1 瓶,4℃保存;
試劑三:液體 14μL×1 支,4℃保存;
組織樣本的前處理:
①總 GAPDH 酶提取:建議稱取約 0.1g 樣本,加入 1mL 提取液一,冰浴勻漿后超聲破碎(冰浴,200W,破碎 3s,間歇 7s,總時間 1min),然后 4℃,8000g 離心 10min,取上清測定。
②胞漿和葉綠體 GAPDH 酶的分離:按照植物組織質量(g):提取液體積(mL)為 1:5~10的比例(建議稱取約 0.1g 樣本,加入 1mL 提取液一),冰浴勻漿后于 4℃,200g 離心 5min,棄沉淀,取上清在4℃,8000g 離心 10min,取上清用于測定胞漿 GAPDH 酶活性,取沉淀加 1mL 提取液二,震蕩溶解后超聲破碎(冰浴,200W,破碎 3s,間歇 7s,總時間 1min),然后 4℃,8000g 離心 10min,取上清測定葉綠體中 GAPDH 酶活性。
建議測定總 GAPDH 酶活性,按照步驟①提取粗酶液,若需要分別測定胞漿和葉綠體中的GAPDH,則按照步驟②提取粗酶液。細菌或培養細胞的前處理先收集細菌或細胞到離心管內,離心后棄上清;按照細菌或細胞數量(104個):提取液一體積(mL)為 500~1000:1 的比例(建議 500 萬細菌或細胞加入 1mL 提取液一),超聲波破碎細菌或細胞(冰浴,功率 20%或 200W,超聲 3s,間隔 10s,重復 30 次);8000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測。
測定步驟:
1、 分光光度計預熱 30min 以上,調節波長至 340nm,蒸餾水調零。
2、 樣本測定
(1)工作液的配制:將試劑二全部倒入試劑一瓶中,充分溶解,37℃(哺乳動物)或 25℃(其它物種)預熱 10 分鐘;用不完的試劑分裝后-20℃保存,禁止反復凍融。
(2)在試劑三中加入 500μL 蒸餾水,充分混勻待用;用不完的試劑分裝后-20℃保存,禁止反復凍融。
(3)在 1mL 石英比色皿中加入 30μL 樣本、20μL 試劑三和 950μL 工作液,混勻,加入最后一個試劑的同時開始計時,記錄 340nm 處 20s 時的吸光值 A1 和 5min20s 后的吸光值
A2,計算 ΔA=A1-A2。
GAPDH 活性計算
(1)按樣本蛋白濃度計算
單位的定義:每 mg 組織蛋白每分鐘消耗 1 nmol 的 NADH 定義為一個酶活力單位。GAPDH(nmol/min/mg prot)=[ΔA×V 反總÷(ε×d)×109]÷(V 樣×Cpr) ÷T=1072×ΔA÷Cpr
(2)按樣本鮮重計算
單位的定義:每 g 組織每分鐘消耗 1 nmol 的 NADH 定義為一個酶活力單位。GAPDH(nmol/min /g 鮮重)=[ΔA×V 反總÷(ε×d)×109]÷(W ×V 樣÷V 樣總) ÷T=1072×ΔA÷W
(3)按細菌或細胞密度計算
單位的定義:每一萬個細菌或細胞每分鐘消耗 1 nmol 的 NADH 定義為一個酶活力單位。GAPDH(nmol/min/104cell)=[ΔA×V 反總÷(ε×d)×109]÷(500 ×V 樣÷V 樣總) ÷T=2.144×ΔAV 反總:反應體系總體積,1×10-3L;ε:NADH 摩爾消光系數,6.22×103L / mol /cm;d:比色皿光徑,1cm;V 樣:加入樣本體積,0.03 mL;V 樣總:加入提取液體積,1 mL;T:反應時間,5 min;Cpr:樣本蛋白質濃度,mg/mL;W:樣本質量,g;500:細菌或細胞總數,500 萬。
生化檢測試劑盒實驗操作說明:
一、抗氧化系列生化檢測試劑盒
包括氧化酶(XO)活性分析、超氧陰離子清除能力分析、葡萄糖氧化酶活性(GOD)檢測、總抗氧化能力(TAC)檢測、植物原花青素(OPC)含量檢測、植物類黃酮含量檢測、植物總酚(TP)含量檢測試劑盒。
氧化酶(XO)活性分析試劑盒為例,提供了一種簡單易用的比色分析法,用于測定各種樣品中的XO活性,特點是測定血清,血漿,組織/細胞裂解物和其他生物體液中的氧化酶活性,以及廣泛的檢測范圍:15.6 -500 mU/mL。
二、氧化系列生化檢測試劑盒
包括過氧化氫酶 (CAT) 活性分析、過氧化氫(H2O2)檢測、脂質過氧化(丙二醛) 分析、蛋白質羰基含量檢測、超氧陰離子含量檢測等試劑盒。
蛋白質羰基含量檢測試劑盒(比色法)為例,提供了一種簡單易用的比色法,用于分析不同生物樣品(細胞/組織裂解液,生物液體)中蛋白質羰基含量。在370 nm處有特征吸收峰。
特點是:1.測定組織樣本、細胞、細菌、血清等中的蛋白質羰基含量。2.樣本處理、實驗步驟以及結果計算更加詳盡準確精煉。3.保質期長。
三、抗逆系列生化檢測試劑盒
包括超氧化物歧化酶 (SOD) 活力檢測、羥自由基清除能力分析、多酚氧化酶(PPO)活性檢測、過氧化物酶(POD)活性檢測等試劑盒。
超氧化物歧化酶 (SOD) 活力檢測試劑盒為例,提供一種簡單易用的比色測定法,用于定量測定血清,血漿,組織/細胞裂解液和其它生物體液中的SOD酶活性。
特點是:1.測定血清,血漿,組織/細胞裂解物和其他生物體液中的SOD酶活性。2.通過WST-8法測定SOD活性,zui大抑制率可接近100%,不受一些常見干擾因素的干擾。3.廣泛的檢測范圍:3.13- 200U/mL。
公司正在出售的產品:
血清高密度脂蛋白(HDLC)測試盒微量法 | 肉毒堿棕櫚酰轉移酶(CPT1)測試盒 |
胼胝質含量測試盒 | 肉桂醇脫氫酶(CAD)測試盒 |
漆酶測試盒 | 肉桂酸4羥化酶(C4H)測試盒 |
羥自由基清除能力測試盒 | 乳酸含量(LA)測試盒 |
蘋果酸合酶(MS)測試盒 | 乳酸脫氫酶(LDH)測試盒 |
葡萄糖6磷酸(6PG)測試盒 | 艾柯病毒IgG檢測試劑盒 ECHO IgG ELISA Kit |
葡萄糖6磷酸酶(G6P)測試盒 | 拓撲異構Ⅱβ檢測試劑盒 TOP2β ELISA Kit |
葡萄糖含量測試盒 | 脫中胚蛋白檢測試劑盒 EOMES ELISA Kit |
胼胝質含量測試盒 | 脫氧胸苷SUAN激檢測試劑盒 DTYMK ELISA Kit |
蘋果酸合酶(MS)測試盒 | 脫氧尿苷三磷SUAN檢測試劑盒 DUT ELISA Kit |
葡萄糖6磷酸(6PG)測試盒 | 脫氧鳥苷激檢測試劑盒 DGUOK ELISA Kit |
葡萄糖6磷酸酶(G6P)測試盒 | 脫氧核糖核SUANⅩ檢測試劑盒 DNASEⅩ ELISA Kit |
葡萄糖含量測試盒 | 脂質過氧化物(LPO)測試盒微量法脫氧核糖核SUANⅡ檢測試劑盒 DNASEⅡ ELISA Kit |
葡萄糖脫氫酶(GCDH)測試盒 | 脫氧輔蛋白羥化/單加氧檢測試劑盒 DOHH ELISA Kit |
葡萄糖氧化酶(GOD)測試盒 | 脫氧輔蛋白合檢測試劑盒 DHPS ELISA Kit |