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詳細介紹
冷凍保存細胞之方法？
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長期儲存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長期儲存。*-20 ℃不可超過1 小時， 以防止冰晶過大，造成細胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。
產品屬性：
產品名稱 | 規格 | 貨號 |
| RWPE-1 (正常前列腺上皮細胞) | 1×10?cells/T25培養瓶 | GOY-01X0199 |
商品介紹：
名稱 RWPE-1 (正常前列腺上皮細胞) 別稱RWPE1 年齡（性別）男；54歲 組織來源器官：前列腺； 疾病：正常； 細胞類型：上皮細胞 生長特性貼壁細胞 細胞形態上皮細胞樣 背景描述一位正常男性前列腺組織切片的周圍區域的上皮細胞用單拷貝的人乳頭瘤病毒的18(HPV-18)進行轉化，建立了RWPE-1細胞株[PubMed:9214605]。在三維Matrigel培養時，在雄激素作用下，RWPE-1細胞形成腺胞并向培養基中分泌PSA[PubMed:11170142]。當與Matrigel或基質細胞混合注射雄性裸鼠時，RWPE-1細胞也能形成腺胞[PubMed:11304724]并產生PSA。來源于RWPE-1細胞再用Kirstin鼠類腫瘤病毒轉染Ki-ras基因，建立了能成瘤的RWPE-2細胞株[PubMed:9214605]和RWPE2-W99細胞株。另外，用N-甲醇-N-(MNU)處理RWPE-1細胞，建立了一系列模擬前列腺癌進程中不同時期的成瘤細胞株。它們是WPE1-NA22、WPE1-NB14、WPE1-NB11和WPE1-NB26細胞株。據提供者報道，RWPE-1細胞經過檢測，乙肝、丙肝、人免疫缺陷病毒都呈陰性。 生物安全等級2 生長培養基K-SFM＋0.05mg/mL BPE＋5ng/mL EGF＋1% P/S 推薦傳代比例1:2-1:4 推薦換液頻率2~3次/周 倍增時間~22 hours 凍存條件 凍存液：55% 基礎培養基+40%FBS+5%DMSO 溫度：液氮 培養條件 氣相：空氣，95%；CO2，5% 溫度：37℃ 致瘤性No, in nude mice (with or without Matrigel). No, in soft agar. 受體表達情況androgen receptor, expressed (upregulated upon exposure to androgen) 抗原表達情況kallikrein 3, KLK3 (prostate specific antigen, PSA); Homo sapiens, expressed (upon exposure to androgen); (upon exposure to androgen) 基因表達情況cytokeratin 18, cytokeratin 8; Tumor Supressor Gene(s): p53+, pRB+ |
實驗要點及說明：
1．本方法適用于貼壁細胞培養，而不適用于懸浮細胞培養，懸浮細胞可使用滴片法；
2．所使用的蓋玻片應該為優質玻璃，并經過鉻酸洗液處理；
3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時動作要輕；
4．如果需要更多生長狀態一致的細胞，可以使用較大的培養皿，但不宜過大，以避免培養液的浪費和增加污染機率；
5．如果細胞貼壁生長能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
實驗報告：
一、分離與培養：
1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將成1mm3左右大小；
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養基終止消化后4℃放置；
3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織*被消化；
4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養基混懸，接種于25cm2培養瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養箱中培養；
5、差速貼壁1h后，吸出培養基，按實驗需要接種于6孔板中繼續培養；
二、免疫熒光鑒定：
1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；
2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；
5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；
6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
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