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詳細介紹
冷凍保存細胞之方法？
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長期儲存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長期儲存。*-20 ℃不可超過1 小時， 以防止冰晶過大，造成細胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。
產品屬性：
產品名稱 | 規格 | 貨號 |
| 293T/17 (胚腎細胞) | 1×10?cells/T25培養瓶 | GOY-01X0465 |
商品介紹：
名稱 293T/17 (胚腎細胞) 別稱HEK 293T/17; 293T/17 種屬人類 年齡（性別）胎兒 組織來源腎 生長特性貼壁細胞 細胞形態上皮細胞樣 背景描述293T/17細胞株是293T細胞株的衍生株，293T是293 [HEK-293]細胞株插入了SV40 T-antigen的溫度敏感基因形成的高轉衍生株。293T細胞進行克隆，檢測pBND和pZAP載體，得到一株能生成高滴度感染逆轉錄病毒的衍生株293T/17細胞。293T/17細胞持續表達猿病毒40(SV40)大T抗原，而因其高轉染能力篩選到17號克隆。293T/17細胞用pCRIPenv-和pCRIPgag-2載體轉染得到ANJOU65細胞株，ANJOU65細胞再用pCRIPgag-2和pGPT2E載體轉染得到親宅性外殼表達細胞株BOSC 23。ANJOU65細胞用攜帶gpt抗性基因的pCRIPAMgag載體轉染得到Bing雙向性表達包裝細胞株。 生物安全等級2 生長培養基DMEM＋10% FBS＋1% P/S 推薦傳代比例1:3-1:4 推薦換液頻率2~3次/周 凍存條件 凍存液：55% 基礎培養基+40%FBS+5%DMSO 溫度：液氮 培養條件 氣相：空氣，95%；CO2，5% 溫度：37℃ 注意事項該細胞貼壁松散，操作時請盡量輕柔；換液時需預熱培養基；收貨如有大塊脫落的細胞團，為正常現象，請按照收貨注意事項處理。 |
實驗要點及說明：
1．本方法適用于貼壁細胞培養，而不適用于懸浮細胞培養，懸浮細胞可使用滴片法；
2．所使用的蓋玻片應該為優質玻璃，并經過鉻酸洗液處理；
3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時動作要輕；
4．如果需要更多生長狀態一致的細胞，可以使用較大的培養皿，但不宜過大，以避免培養液的浪費和增加污染機率；
5．如果細胞貼壁生長能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
實驗報告：
一、分離與培養：
1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將成1mm3左右大小；
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養基終止消化后4℃放置；
3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織*被消化；
4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養基混懸，接種于25cm2培養瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養箱中培養；
5、差速貼壁1h后，吸出培養基，按實驗需要接種于6孔板中繼續培養；
二、免疫熒光鑒定：
1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；
2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；
5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；
6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
ADAP2 基因全長ORF克隆
B3GALT4 基因全長ORF克隆
PEX14 基因全長ORF克隆
AGPAT3 基因全長ORF克隆
FBLIM1 基因全長ORF克隆
HSD3B2 基因全長ORF克隆
ACOT7 基因全長ORF克隆
OPRL1 基因全長ORF克隆
DRG1 基因全長ORF克隆
ACTL8 基因全長ORF克隆
293T/17 (胚腎細胞) 100mL Tricine Buffer,0.5M pH6.5 Tricine Buffer,0.5M pH6.5 常溫保存
30µL HRP標記內參抗體（GAPDH）
250mL Sodium Borate Buffer（硼酸鈉緩沖液）,0.5M,pH8.0 Sodium Borate Buffer,0.5M,pH8.0 常溫保存
100g RNPVP K30 (聚乙烯咯烷酮K30) 常溫
2 ug pEBFP-N1 pEBFP-N1 低溫運輸，-20℃保存
CDC厭氧菌瓊脂 CDC Anaerobic Agar 250g
25g 葡聚糖凝膠 LH-20 Sephadex LH-20 室溫保存
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