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HELF (胚肺成纖維細胞)

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更新時間:2025-02-26 11:42:53瀏覽次數:607

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產品簡介

供貨周期 現貨 規格 1×10?cells/T25培養瓶
貨號 GOY-01X0279 應用領域 化工
主要用途 產品僅供科研使用    
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體液氧化應激活性氧(ROS)初級熒光測定試劑盒 50次
活體細胞氧化應激活性氧(ROS)原位染色

詳細介紹

產品屬性: 

產品名稱

規格

貨號

HELF (胚肺成纖維細胞)

1×10?cells/T25培養瓶

GOY-01X0279

商品介紹:

名稱    HELF (胚肺成纖維細胞) 

生長特性貼壁細胞

細胞形態成纖維細胞樣

生長培養基DMEM10% FBS1% P/S

推薦傳代比例1:3-1:4

推薦換液頻率2~3/

凍存條件

凍存液:55% 基礎培養基+40%FBS+5%DMSO

溫度:液氮

培養條件

氣相:空氣,95%CO25%

溫度:37℃

冷凍保存細胞之方法?

冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ (-20 ℃30 分鐘*) → -80 ℃16~18 小時(或隔夜) → 液氮槽vaporphase 長期儲存。

冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下, 再放入液氮槽vapor phase長期儲存。*-20 ℃不可超過1 小時, 以防止冰晶過大,造成細胞大量死亡,亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中,惟存活率稍微降低一些。

88.jpg

實驗要點及說明:

1.本方法適用于貼壁細胞培養,而不適用于懸浮細胞培養,懸浮細胞可使用滴片法;

2.所使用的蓋玻片應該為優質玻璃,并經過鉻酸洗液處理;

3.蓋玻片非常薄,易碎,取放蓋玻片時動作要輕;

4.如果需要更多生長狀態一致的細胞,可以使用較大的培養皿,但不宜過大,以避免培養液的浪費和增加污染機率;

5.如果細胞貼壁生長能力較差,可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。

實驗報告:

一、分離與培養:

1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,將成1mm3左右大小;

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養基終止消化后4℃放置;

3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復此步驟2-3次,直至組織*被消化;

4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細胞用含有10% FBS DMEM/F12培養基混懸,接種于25cm2培養瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養箱中培養;

5、差速貼壁1h后,吸出培養基,按實驗需要接種于6孔板中繼續培養;

二、免疫熒光鑒定:

1、待心房肌細胞生長至80%融合時,棄去培養基,用溫育的PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min;

2、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;

3、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細胞30min;

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜;

5、PBS沖洗細胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;

6、用PBS沖洗3次,每次10min,在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

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HELF (胚肺成纖維細胞)1g 1,4- 雙 (5- 苯基 -2- 噁唑基 ) 苯 1,4-Bis(5-phenyl-2-oxazolyl)benzene 室溫保存

500mL Tris-HCl Buffer,2.0M,pH8.0  Tris-HCl Buffer,2.0M,pH8.0  常溫保存

5mL 酵母蛋白抑制劑 Protease Inhibitor for Yeast 4℃保存

2 ug pTWIN 1 pTWIN 1 低溫運輸,-20℃保存

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2 ug pEFFP-C2 pEFFP-C2 低溫運輸,-20℃保存

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