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詳細介紹
冷凍保存細胞之方法？
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長期儲存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長期儲存。*-20 ℃不可超過1 小時， 以防止冰晶過大，造成細胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。
產品屬性：
產品名稱 | 規(guī)格 | 貨號 |
| 大鼠腎小球內皮細胞 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | GOY-01X0923 |
商品介紹：
名稱 大鼠腎小球內皮細胞 2.組織來源：腎組織 3.產品規(guī)格：5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶 4.細胞簡介： 大鼠腎小球內皮細胞分離自腎組織；腎臟是機體的重要器官，它的基本功能是生成尿液，借以清除體內代謝產物及某些廢物、毒物，同時經重吸收功能保留水份及其他有用物質，如葡萄糖、蛋白質、氨基酸、鈉離子、鉀離子、碳酸氫鈉等，以調節(jié)水、電解質平衡及維護酸堿平衡。腎臟同時還有內分泌功能，生成腎素、促紅細胞生成素、活性素D3、前列腺素、激肽等，又為機體部分內分泌激素的降解場所和腎外激素的靶器官。腎臟的這些功能，保證了機體內環(huán)境的穩(wěn)定，使新陳代謝得以正常進行。腎小球是腎元中的用于將血液過濾生成原尿的一團毛細血叢，被鮑氏囊所包裹，是尿液形成的重要構造。血液經由入球小動脈進入腎小球。腎小球內的微血管不像其他微血管，匯流入靜脈，而是流入出球小動脈。在腎小球內，微血管受到高壓，而加速了超濾作用（hyperfiltration）的進行。微血管中的血液經由超濾作用之后，形成濾液，滲入鮑氏囊內。腎小球與鮑氏囊合稱為腎小體，腎小球的過濾速率便稱為腎小球過濾率。腎小球內皮細胞是一類特殊微血管類型的細胞。細胞為圓形、多角形，單層貼壁生長；細胞質豐富，細胞核為圓形或卵圓形。腎小球內皮細胞被覆于腎小球毛細血管壁腔側，與血流直接接觸，是腎小球濾過膜的第一道屏障，可粘附細菌和白細胞，修復基底膜，并有抗凝、抗血栓的作用；所以，體外培養(yǎng)的腎小球內皮細胞在免疫學和病理生理學領域中具有重要的研究價值。 5.方法簡介： 實驗室分離的大鼠腎小球內皮細胞采用先機械研磨過不銹鋼網篩分離得到腎小球、后用膠原酶消化，結合內皮細胞專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。 6.質量檢測： 實驗室分離的大鼠腎小球內皮細胞經CD31免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。 7.培養(yǎng)信息： 包被條件PLL（0.1mg/ml），明膠（0.1%） 培養(yǎng)基含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等 產品貨號CM-R063 換液頻率每2-3天換液一次 生長特性貼壁 細胞形態(tài)內皮細胞樣 傳代特性可傳2-3代 消化液0.25%胰蛋白酶 培養(yǎng)條件氣相：空氣，95%；CO2，5% |
實驗要點及說明：
1．本方法適用于貼壁細胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細胞培養(yǎng)，懸浮細胞可使用滴片法；
2．所使用的蓋玻片應該為優(yōu)質玻璃，并經過鉻酸洗液處理；
3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時動作要輕；
4．如果需要更多生長狀態(tài)一致的細胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過大，以避免培養(yǎng)液的浪費和增加污染機率；
5．如果細胞貼壁生長能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
實驗報告：
一、分離與培養(yǎng)：
1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將成1mm3左右大小；
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；
3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織*被消化；
4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；
二、免疫熒光鑒定：
1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；
2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；
5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；
6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
甲型流感 H5N1 (chicken/Yamaguchi/7/2004) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 基因全長ORF克隆 (密碼子優(yōu)化)
甲型流感 H5N1 (Thailand/1(KAN-1)/2004) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 基因全長ORF克隆 (密碼子優(yōu)化)
甲型流感 H5N1 (Thailand/1(KAN-1)/2004)神經 (Neuraminidase / NA) 基因全長ORF克隆 (密碼子優(yōu)化)
甲型流感 H1N1 (Beijing/22808/2009) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 基因全長ORF克隆 (密碼子優(yōu)化)
甲型流感 H5N1 (Cambodia/S1211394/2008) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 基因全長ORF克隆 (密碼子優(yōu)化)
甲型流感 H4N8 (chicken/Alabama/1/1975) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 基因全長ORF克隆 (密碼子優(yōu)化)
甲型流感 H3N2 (Babol/36/2005)神經 (Neuraminidase / NA) 基因全長ORF克隆 (密碼子優(yōu)化)
乙型流感 (Brisbane/60/2008) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 基因全長ORF克隆 (密碼子優(yōu)化)
甲型流感 H1N1 (New York/18/2009) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 基因全長ORF克隆 (密碼子優(yōu)化)
甲型流感 H4N4 (mallard duck/Alberta/299/1977) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 基因全長ORF克隆 (密碼子優(yōu)化)
大鼠腎小球內皮細胞0.312-20 ng/mL 人C-X-C趨化因子受體5(CXC-R5)ELISA試劑盒
0.312-20 ng/mL 人增殖細胞核抗原相關因子(PCNA-associated factor)ELISA試劑盒
硅酸鹽細菌培養(yǎng)基 英文名稱：Silicate Bacteria Medium 產品規(guī)格：250g
0.156-10 ng/mL ELISA Kit for Human Insulin-like growth factor-binding protein 1
78-5000 pg/mL 人70kDa熱休克蛋白6(HSPA6)ELISA試劑盒
測定培養(yǎng)基 英文名稱：Folic Acid Assay Medium 產品規(guī)格：250g
6.25-400 pg/mL 人垂體腫瘤轉化基因2(PTTG2)ELISA試劑盒
0.312-20 ng/mL 人硫酸酯2(SULF2)ELISA試劑盒
0.78-50 ng/mL ELISA Kit for Human Regulator of G-protein signaling 19
0.312-20 ng/mL 人載脂蛋白A1(apo-A1)ELISA試劑盒
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