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詳細介紹
實驗要點及說明：
1．本方法適用于貼壁細胞培養，而不適用于懸浮細胞培養，懸浮細胞可使用滴片法；
2．所使用的蓋玻片應該為優質玻璃，并經過鉻酸洗液處理；
3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時動作要輕；
4．如果需要更多生長狀態一致的細胞，可以使用較大的培養皿，但不宜過大，以避免培養液的浪費和增加污染機率；
5．如果細胞貼壁生長能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
產品屬性：
產品名稱 | 規格 | 貨號 |
| 大鼠羊膜上皮細胞 | 5×10?Cells/T25培養瓶 | GOY-01X1339 |
商品介紹：
名稱 大鼠羊膜上皮細胞 2.組織來源：胎盤組織 3.產品規格：5×105cells/T25細胞培養瓶 4.細胞簡介： 大鼠羊膜上皮細胞分離自胎盤組織；胎盤（placenta）是哺乳動物妊娠期間由胚胎的胚膜和母體子宮內膜聯合長成的母子間交換物質的過渡性器官，由羊膜、葉狀絨毛膜和底蛻膜構成。胎兒在子宮中發育，依靠胎盤從母體取得營養，而雙方保持相當的獨立性。胎盤還產生多種維持妊娠的激素，是一個重要的內分泌器官。有些爬行類和魚類也以胎生方式繁殖后代，胚胎生長出一些輔助結構如卵黃囊、鰓絲等與母體組織緊密結合，以達到母子間物質的交換，這樣的結構稱假胎盤。羊膜是胎盤的最內層，與眼結膜組織結構相似，含有眼表上皮細胞，包括結膜細胞和角膜上皮細胞生長所需要的物質，其光滑，無血管、神經及淋巴，具有一定的彈性；在電鏡下，其分為五層：上皮層、基底膜、致密層、纖維母細胞層和海綿層，羊膜基底膜和羊膜羊膜基質層含有大量不同的膠元，主要為Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ、Ⅶ型膠原和纖維粘連蛋白、層粘連蛋白等成份。羊膜細胞主要由羊膜上皮細胞和羊膜間充質細胞組成，均具有多分化潛能，可轉化為神經元，且還有合成、釋放生物活性物質和神經營養因子的功能。 5.方法簡介： 實驗室分離的大鼠羊膜上皮細胞采用胰蛋白酶-膠原酶混合消化法結合差速貼壁法，并通過上皮細胞專用培養基培養篩選制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。 6.質量檢測： 實驗室分離的大鼠羊膜上皮細胞經Cytokeratin-18免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。 7.培養信息： 包被條件鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2） 培養基含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等 產品貨號CM-R227 換液頻率每2-3天換液一次 生長特性貼壁 細胞形態上皮細胞樣 傳代特性可傳1-2代 消化液0.25%胰蛋白酶 培養條件氣相：空氣，95%；CO2，5% |
冷凍保存細胞之方法？
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長期儲存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長期儲存。*-20 ℃不可超過1 小時， 以防止冰晶過大，造成細胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。
實驗報告：
一、分離與培養：
1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將成1mm3左右大小；
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養基終止消化后4℃放置；
3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織*被消化；
4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養基混懸，接種于25cm2培養瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養箱中培養；
5、差速貼壁1h后，吸出培養基，按實驗需要接種于6孔板中繼續培養；
二、免疫熒光鑒定：
1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；
2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；
5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；
6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
大鼠 DDR1 Kinase / MCK10 / CD167 細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
大鼠 CD73 / NT5E 細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
大鼠 CD10 / Neprilysin / MME 細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
大鼠 TNFR1 / CD120a / TNFRSF1A 細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
小鼠 M-CSF / CSF-1 細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
小鼠 TrkA / NTRK1 細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
小鼠 ICAM-2 / CD102 細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
LIF 細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
PSGL-1 / CD162 / SELPLG 細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
CD44 細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
大鼠羊膜上皮細胞二氫黃酮甙 97%2-(二叔丁基膦)聯苯 97%(LDH)ELISA Kit 大鼠乳酸脫氫
二氫黃酮甙 分析標準品2-(二叔丁基膦)聯苯 AR,97.0%(MAG Ab)ELISA Kit 大鼠抗髓鞘相關糖蛋白抗體
柚皮苷 95%4,7-二苯基-1,10-菲啰啉 99%(CTX- I )ELISA Kit 大鼠Ⅰ型膠原C端肽
槲皮素,二水 97%N,N'-二苯基聯苯 98%(pIKB Alpha)ELISA Kit 大鼠化核因子κB抑制蛋白α
槲皮素 分析標準品，≥98.5%二氫尿嘧 99%(NF-κB)ELISA Kit 大鼠核因子κB
L-鼠李糖，一水 99%L-2,4-二丁酸 98+%(DC-SIGN/CD209)ELISA Kit 大鼠樹突狀表面特異性C型凝集素-間黏附分子3結合非整合素分子
曲克蘆丁 97%2,6-二氯-3-(三氟甲基)吡 98%(P I NP)ELISA Kit 大鼠Ⅰ型前膠原N端前肽
銻粉 99.5% metals basis1,3-二氯四甲基二硅氧烷 97%(ADAM9)ELISA Kit 大鼠解整合素樣金屬蛋白9
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