支原體污染的來源包括工作環境的污染、操作者本身的污染（一些支原體在人體是正常菌群）、培養的污染、污染支原體的細胞造成的交叉污染、實驗器材帶來的污染和用來制備細胞的原始組織或器官的污染。細胞培養工作中，主要從以下幾個方面來預防支原體的污染：控制環境污染；嚴格實驗操作；細胞培養和器材要保證無菌；在細胞培養中加入適量的抗生素。
如果受到支原體污染時，細胞形態較之無明顯變化，極易被忽視，往往直到污染非常嚴重時才能發現。受污染的細胞膜上可能有幾百個支原體，這些支原體競爭營養并釋放有毒的代謝產物，嚴重影響實驗結果。
『支原體qPCR檢測試劑盒』介紹
德國MB公司生產的支原體qPCR檢測試劑盒（均為探針法檢測），依據操作步驟的細微差別，
分『經典法』和『一步法』兩種。
此兩類試劑盒較其他廠家同類產品，具有以下*的優點：
①經典法qPCR試劑盒遵循歐洲藥典流程要求
②高特異性，一次檢測即可涵蓋了所有可能感染細胞的支原體物種（涵蓋歐洲藥典規定的9種支原體），根據序列一致性，至少可以檢測到107種支原體物種。操作簡單，易于觀察。
（使用MB的試劑盒，下表中列出的支原體物種均為陽性，其他微生物或真核細胞均為陰性，無交叉反應）
第1步：樣本處理
a.細胞培養上清
b. 生物藥或需遵循藥典的樣本
說明：①樣品基質可能會影響檢測的靈敏度。收集和篩選更高的樣品量可提高測定靈敏度。
②細胞培養物樣本含豐富的DNA酶，在低溫下也能降解支原DNA，影響檢測靈敏度。
建議：樣本做DNA抽提處理，實現高靈敏度。
推薦：Venor® Gem Sample Preparation Kit
該DNA抽提試劑盒已經過廣泛驗證。
第2步：試劑制備
a. 凍干粉溶解
b. 反應體系制備
b1) 樣品為細胞上清篩查——反應體系制備
b2) 樣品為生物藥——反應體系制備
第3步：啟動熒光定量PCR儀
第4步：結果判別
FAM通道：檢測支原體熒光信號。HEX通道：檢測內控對照熒光信號。
支原體DNA和內控DNA存在信號的競爭性抑制。
支原體DNA越多，FAM通道信號越高，檢測內控對照的HEX通道信號越低。
定量需基于Ct值和DNA標準曲線。
Ct＜40為陽性結果。Ct≥40為陰性結果。
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