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上海谷研實業(yè)有限公司
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當(dāng)前位置:上海谷研實業(yè)有限公司>>分子生物學(xué)試劑>>探針標(biāo)記及檢測>> 50微升細(xì)胞內(nèi)鈣離子熒光探針(Fura-2 AM)

細(xì)胞內(nèi)鈣離子熒光探針(Fura-2 AM)

參  考  價面議
具體成交價以合同協(xié)議為準(zhǔn)

產(chǎn)品型號50微升

品       牌R&D/美國

廠商性質(zhì)經(jīng)銷商

所  在  地上海市

更新時間:2022-04-22 10:35:32瀏覽次數(shù):236次

聯(lián)系我時,請告知來自 化工儀器網(wǎng)
供貨周期 現(xiàn)貨 貨號 GOY-F10143
應(yīng)用領(lǐng)域 化工 主要用途 僅供科研使用
細(xì)胞內(nèi)鈣離子熒光探針(Fura-2 AM)公司正*的各種產(chǎn)品組織甘肽過氧化物酶(GSH PX)活性比色法定量檢測試劑盒
酵母甘肽過氧化物酶(GSH PX)活性比色法定量檢測試劑盒
細(xì)胞甘肽S轉(zhuǎn)移酶(GSH ST)總活性比色法定量檢測試劑盒
組織甘肽S轉(zhuǎn)移酶(GSH ST)總活性比色法定量檢測試劑盒
血液甘肽S轉(zhuǎn)移酶(GSH ST)總活性比色法定量檢測試劑盒

DNA提取流程圖:

QQ截圖20220414142532.png

下列是產(chǎn)品的訂購信息!產(chǎn)品僅用于科研

中文名稱

英文名稱

產(chǎn)品規(guī)格

貨號

細(xì)胞內(nèi)鈣離子熒光探針(Fura-2   AM)

Fura-2 pentakis   ester

50微升

GOY-F10143

產(chǎn)品詳細(xì)介紹:

本品是常用的檢測細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度的熒光探針之一。 用于細(xì)胞內(nèi)鈣離子檢測時,Fura-2 AM的常用濃度為0.5-5μM。通常用含有0.5-5μMFura-2 AM的適當(dāng)溶液和細(xì)胞一起在4-37℃孵育15-60分鐘,即可完成熒光探針的裝載。 Fura-2 AM(鈣離子熒光探針)是配制于無水DMSO(anhydrous   DMSO)中的儲存液,濃度為2mM

分子式:C44H47N3O24

分子量:1001.9

Fura-2 AM是一種可以穿透細(xì)胞膜的熒光染料。Fura-2 AM的熒光比較弱,大激發(fā)波長為369nm,大發(fā)射波長為

478nm,并且其熒光不會隨鈣離子濃度改變而改變。Fura-2 AM進(jìn)入細(xì)胞后可以被細(xì)胞內(nèi)的酯酶剪切形成Fura-2,從而被滯留在細(xì)胞內(nèi)。Fura-2可以和鈣離子結(jié)合,結(jié)合鈣離子后在330-350nm激發(fā)光下可以產(chǎn)生較強(qiáng)的熒光,而在380nm激發(fā)光下則會導(dǎo)致熒光減弱。這樣就可以使用340nm380nm這兩個熒光的比值來檢測細(xì)胞內(nèi)的鈣離子濃度,可以消除不同細(xì)胞樣品間熒光探針裝載效率的差異,熒光探針的滲漏,細(xì)胞厚度差異等一些誤差因素。Fura-2和鈣離子結(jié)合后,大激發(fā)波長為335nm(大激發(fā)波長隨離子濃度的的不同而有所不同),大發(fā)射波長為505nm。實際檢測時推薦使用的激發(fā)波長為340nm,發(fā)射波長為510nm。如果做雙波長檢測,則推薦使用的激發(fā)波長為340nm380nmFura-2的激發(fā)光譜參考下圖,不同曲線表示不同鈣離子濃度時的激發(fā)光譜。

Fura-2相對而言有較強(qiáng)的抗熒光淬滅能力,在熒光顯微鏡或其它熒光檢測設(shè)備上可以連續(xù)檢測1小時而不明顯影響其熒光效果。

注意事項:

1. Fura-2 AM4℃、冰浴等較低溫度情況下會凝固而粘在離心管管底、管壁或管蓋內(nèi),可以20-25℃水浴溫育片刻至全部融解后使用。

2. 熒光染料均存在淬滅問題,請盡量注意避光,以減緩熒光淬滅。

儲存條件:-20℃,有效期6個月。

 

操作步驟:
1.
勻漿處理:a.組織 將組織在液氮中磨碎,50-100mg組織加入1ml TRIzol,用勻漿儀進(jìn)行勻漿處理。樣品體積不應(yīng)超過TRIzol體積10℅
b.
單層培養(yǎng)細(xì)胞 直接在培養(yǎng)板中加入TRIzol裂解細(xì)胞,每10cm2面積(3.5cm直徑的培養(yǎng)板)1ml,用移液器吸打幾次。TRIzol的用量應(yīng)根據(jù)培養(yǎng)板面積而定,不取決于細(xì)胞數(shù)。TRIzol加量不足可能導(dǎo)致提取的RNADNA污染。
c
.細(xì)胞懸液 離心收集細(xì)胞,每5-10×106動物、植物、酵母細(xì)胞或1×107細(xì)菌細(xì)胞加入1ml TRIzol,反復(fù)吸打。加TRIzol之前不要洗滌細(xì)胞以免mRNA降解。一些酵母和細(xì)菌細(xì)胞需用勻漿儀處理。
2
.將勻漿樣品在室溫(15-30)放置5分鐘,使核酸蛋白復(fù)合物*分離。
3
.可選步驟:如樣品中含有較多蛋白質(zhì),脂肪,多糖或胞外物質(zhì)(肌肉,植物結(jié)節(jié)部分等)可于2-810000×g離心10分鐘,取上清。離心得到的沉淀中包括細(xì)胞外膜,多糖,高分子量DNA,上清中含有RNA。處理脂肪組織時,上層有大量油脂應(yīng)去除。取澄清的勻漿液進(jìn)行下一步操作。
5.
每使用1ml TRIzol加入0.2ml,劇烈振蕩15秒,室溫放置3分鐘。
6. 2-8
10000×g離心15分鐘。樣品分為三層:底層為黃色有機(jī)相,上層為無色水相和一個中間層。RNA主要在水相中,水相體積約為所用TRIzol試劑的60℅
7.
把水相轉(zhuǎn)移到新管中,如要分離DNA和蛋白質(zhì)可保留有機(jī)相,進(jìn)一步操作見后。用異丙沉淀水相中的RNA。每使用1ml TRIzol加入0.5ml異丙,室溫放置10分鐘。
8. 2-8
10000×g離心10分鐘,離心前看不出RNA沉淀,離心后在管側(cè)和管底出現(xiàn)膠狀沉淀。移去上清。
兔血栓調(diào)節(jié)蛋白(rabbit TM)   作用:   ELISA   規(guī)格:   48T/96T   進(jìn)口分裝  4-Chlorotestosterone acetate  中文名:醋酸氯  分子式:C21H29ClO3  度:98.0%

兔血栓素B2elisa試劑盒   兔血栓素B2試劑盒   規(guī)格型號:96T/48T   兔血栓素B2試劑盒,規(guī)格型號:96T/48T,來源:elisa試劑盒(進(jìn)口分裝),產(chǎn)品別名:兔血栓素B2試劑盒、兔血栓素B2 elisa試劑盒   保存條件:2-8   保質(zhì)期:6個月。  7-Acetoxy-4-methylcoumarin  中文名:7-乙酰氧基-4-甲基  分子式:C12H10O4  度:95.0%

兔血栓素B2(TXB2)ELISA試劑盒     5-Fluorouracil  51-21-8  中文名:  分子式:C4H3FN2O2  度:98.0%  關(guān)鍵詞: 

兔血栓素B2(TXB2)ELISAKit     4-Aminohippuric acid  61-78-9  中文名:4-氨基馬尿酸  分子式:C9H10N2O3 

兔血清總補(bǔ)體(CH50)ELISA試劑盒     5-Fluorouracil  51-21-8  中文名:  分子式:C4H3FN2O2
(
分析標(biāo)準(zhǔn)品,>99.5%(GC))  Lauric acid  質(zhì)量規(guī)格:分析標(biāo)準(zhǔn)品,>99.5%(GC) 英文名稱RatHistamineELISAKit大鼠組胺(Histamine)規(guī)格:96T/48T

神經(jīng)酸(分析標(biāo)準(zhǔn)品,99.0%(GC))  Nervonic acid  質(zhì)量規(guī)格:分析標(biāo)準(zhǔn)品,99.0%(GC) 鈣離子膜通道鈣交換體(NCX/線粒體)功能熒光檢測試劑盒20

十五烷酸(分析標(biāo)準(zhǔn)品,99.5%(GC))  Pentadecanoic Acid  質(zhì)量規(guī)格:分析標(biāo)準(zhǔn)品,99.5%(GC) ELISAKitTI人真胰島素規(guī)格:48T/96T

泛酸鈣一水合物(標(biāo)準(zhǔn)品)  (+)-Pantothenic acid calcium salt hydrate  質(zhì)量規(guī)格:分析標(biāo)準(zhǔn)品 小鼠粒細(xì)胞趨化蛋白2(GCP2)ELISA試劑盒 ,英文名: GCP2 ELISA Kit

山梨酸鉀(標(biāo)準(zhǔn)品)  Potassium sorbate  質(zhì)量規(guī)格:分析標(biāo)準(zhǔn)品 人補(bǔ)體片斷4b(C4b)ELISA檢測試劑盒HumanComplemefragme4b,C4bELISAKit 96T/48T

全氟辛酸(分析標(biāo)準(zhǔn)品, 用于環(huán)境分析)  Pentadecafluorooctanoic acid  質(zhì)量規(guī)格:分析標(biāo)準(zhǔn)品, 用于環(huán)境分析 大鼠血小板衍生生長因子AA(PDGF-AA)試劑盒 Rat Platelet-Derived Growth Factor AA,PDGF-AA ELISA kit

正辛酸(分析標(biāo)準(zhǔn)品,99.9%(GC))  n-Octanoic acid  質(zhì)量規(guī)格:分析標(biāo)準(zhǔn)品,99.9%(GC) 英文名稱RatHistamineELISAKit大鼠組胺(Histamine)規(guī)格:96T/48T

蓖麻油酸(分析標(biāo)準(zhǔn)品,99%)  Ricinoleic acid  質(zhì)量規(guī)格:分析標(biāo)準(zhǔn)品,99% 鈣離子膜通道鈣交換體(NCX/質(zhì)膜)功能熒光檢測試劑盒20

硬脂酸(分析標(biāo)準(zhǔn)品,99.5%(GC))  Stearic acid  質(zhì)量規(guī)格:分析標(biāo)準(zhǔn)品,99.5%(GC) ELISAKitMEC/CCL28人粘膜相關(guān)上皮趨化因子規(guī)格:48T/96T

甜蜜素(標(biāo)準(zhǔn)品)   Cyclamate  質(zhì)量規(guī)格:分析標(biāo)準(zhǔn)品 小鼠粒細(xì)胞巨噬細(xì)胞集落刺激因子(GMCSF/CSF2)ELISA試劑盒 ,英文名: GMCSF/CSF2 ELISA Kit
細(xì)胞內(nèi)鈣離子熒光探針(Fura-2 AM)細(xì)胞BMK激酶活性定量檢測試劑盒(A/B/C

組織BLK激酶活性定量檢測試劑盒(A/B/C

細(xì)胞BLK激酶活性定量檢測試劑盒(A/B/C

組織AX1激酶活性定量檢測試劑盒(A/B/C

細(xì)胞AX1激酶活性定量檢測試劑盒(A/B/C

實驗步驟
(1)
實驗開始前將RNA提取液于65水浴鍋中預(yù)熱,離心管中加入ME(巰基乙),(10mL80ul,50mL中加入300ul)
(2)
取約0.8g菌絲體(液體培養(yǎng)獲得的菌絲用真空抽濾即可!固體培養(yǎng)就更好說了),在液氮中迅速磨成精細(xì)粉末,裝入50mL離心管,1g材料8mL的量加入預(yù)熱的RNA提取液,顛倒混勻
(3)65
水浴3-10 min,期間混勻2-3
(4)
加入等體積的酚(注意是酸酚pH4.5)::異戊(25:24:1)抽提(10,000rpm,4,5 min)
(5)
取上清,等體積的:異戊(24:1)抽提(10,000rpm,4,5 min)
(6)
加入1/4V體積10M LiCl溶液,4放置6h以上(或過夜)
(7)10,000rpm,4
離心20min
(8)
棄上清,500ul SSTE溶解沉淀
(9)
::異戊(25:24:1)抽提兩次,:異戊(24:1)抽提1(10,000rpm,4,5min)
(10)
2V體積的無水乙,-70冰箱沉淀30min以上
(11)12,000rpm,4
離心20 min
(12)
棄上清.沉淀用70%酒精漂洗一次,干燥
(13)
200ulDEPC處理水溶解
(14)
用非變性瓊脂糖凝膠電泳和紫外分光光度計掃描檢測RNA的質(zhì)量
(
在抽提過程中,若蛋白質(zhì)含量或其它的雜質(zhì)還較多,可以增加抽提次數(shù))


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