HILIC模式中洗脫調整方向
洗脫原理主要是極性相似相容和親水分離分配模式，洗脫時極性強的溶劑越多，保留時間越短；出峰順序是極性弱的先出，極性強的后出，與反相相反，因此適合保留極性強，在反相上無法保留的物質。
實例
CTP、ATP、GTP、UTP的分離：
ATP：三磷酸腺苷
GTP：三磷酸鳥苷
CTP：胞嘧啶核苷三磷酸
UTP：三磷酸尿苷
Ultimate® AQ-C18 4.6*250mm 5μm 磷酸鹽緩沖液（pH呈中性）-乙腈體系，梯度運行見下表：
效果圖
分析：各峰分離良好，但出峰均在純鹽相段出峰，保留弱，部分目標峰的峰型不好，方法重現性不好，易與溶劑峰重合。
根據HILIC的作用原理，該模式適合這類極性物質的分離，故Topsil® Silica 4.6*250mm 5μm：
磷酸鹽-乙腈（25/75）
分析: 四種物質分離*，保留適中，但有雜質峰干擾風險，峰形有可以優化的空間，減少水相，延長保留。
磷酸鹽-乙腈（20/80）
分析：分離良好，峰形改善，雜質無干擾，各目標峰保留增強很多，一針運行時間較長，流動相中水相比例對保留與分離影響較大，與HILIC的分離原理符合，水相為強洗脫能力項，微小比例的改變對色譜效果影響大，水相比例減小。
磷酸鹽-乙腈（22/78）
分析：與預期相一致，保留時間縮短，與雜質能較好分離，可以嘗試梯度，在HILIC模式中水相的微小變化對色譜圖影響大，因此兩針之間的平衡時間建議在10倍柱體積以上，而且平衡時間一致，也可以讓系統達到一個動態平衡，以保證分離效果的重現。
結論
運行HILIC模式時：
1. 考慮樣品極性和溶解性：首先目標一般是強極性物質，且最好是在高比例有機相中有一定溶解性，如果樣品在有機相中不溶或溶解度很低，或容易產生其他反應的，則不適用；
2. 考慮緩沖鹽與有機相的互溶性：調節流動相比例時，如果流動相中含鹽，要考慮鹽在有機相中的溶解度，避免出現鹽析等現象；
3. 關注系統真正的平衡狀態：系統平衡不僅僅是關注基線噪音和漂移的問題，是連續進樣獲得穩定的保留時間和峰面積，測試過程中會碰到系統平衡慢的問題，需要附上解決或改善方法；
4. 關注樣品的穩定性：確保所使用的樣品溶液是zui接近初始狀態的，測試過程中需關注溶液穩定狀態，必要時臨用新制；根據整個方法時樣品的主峰情況確定最終的配制方法和保存方法。
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