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Hoechst 33342 *超級純*

產(chǎn)品描述

Hoechst 33342是一種可以穿透細(xì)胞膜的藍(lán)色熒光染料，對細(xì)胞的毒性較低，在嵌入雙鏈DNA后釋放強烈的藍(lán)色熒光。Hoechst 系列染料因與DNA結(jié)合的特性，也常被用來進行線粒體DNA的觀察。

Hoechst33258和Hoechst33342是兩種非常相近的Hoechst染料，他們都在紫外段350 nm被激發(fā)，發(fā)射波長都為461 nm，兩種染料經(jīng)常被用來替代另一種熒光染料DAPI. Hoechst 33342比33258具有更強的親脂性，因此能更好的透過完整的細(xì)胞膜，在部分實驗中Hoechst33258的細(xì)胞透過性存在明顯不足。用于細(xì)胞核染色時，推薦的Hoechst 33342工作終濃度為0.5～5 μM，在一些敏感性實驗時，建議設(shè)置多個染色濃度，以獲得需要的染色效果。

訂購信息

技術(shù)參數(shù)

　　光學(xué)性質(zhì)：Ex(nm)：350      Em(nm)：461

　　化學(xué)參數(shù)：分子量：561.93  溶劑：Water        CAS：23491-52-3

保存方法

　　冰袋（wet ice）運輸，-20℃干燥避光保存，保質(zhì)期12個月。

使用方法

1. 緩沖液制備。用PBS或合適的緩沖液制備10～50 μM Hoechst 33342染色液。李記生物也提供配制好的20 mM Hoechst 33342（CAT:AC12L021）產(chǎn)品，既方便存放，以方便稀釋備用。

2. 固定的細(xì)胞或組織染色。對于固定的細(xì)胞或組織樣品，固定后，適當(dāng)洗滌去除固定劑。依次按步驟進行免疫熒光染色，和Hoechst33342染色。如果不進行免疫熒光染色，則直接按步驟進行Hoechst33342染色。

（1）對于貼壁細(xì)胞或組織切片：加入適量Hoechst 33342染色液，覆蓋住樣品即可。對于懸浮細(xì)胞：至少加入待測染色樣品體積3倍的染色液，混勻。室溫放置3~5 min。

（2）吸除Hoechst 33342染色液，用TBST、PBS或生理鹽水洗滌2~3次，每次3~5 min。

（3）直接在熒光顯微鏡下觀察或封片后熒光顯微鏡下觀察。激發(fā)波長350 nm，發(fā)射波長461 nm。

3. 活細(xì)胞或組織染色

（1）細(xì)胞培養(yǎng)物中加入適量Hoechst 33342染色液，約1/10細(xì)胞培養(yǎng)基體積，必須充分覆蓋住待染色的樣品。通常對于六孔板一個孔需加入1 mL染色液，對于96孔板一個孔需加入100 μL染色液。

（2）在37℃培養(yǎng)細(xì)胞10～20 min。

（3）用PBS或合適的緩沖液洗細(xì)胞兩次。

（4）直接在熒光顯微鏡下觀察或封片后熒光顯微鏡下觀察。激發(fā)波長350 nm，發(fā)射波長461 nm。

注意事項

1. Hoechst 33342溶于水，溶解度可達(dá)20mM(約10mg/ml)。您也可直接購買20 mM的液體規(guī)格產(chǎn)品（貨號:AC12L021）。

2. Hoechst 33342對人體有一定刺激性，請注意適當(dāng)防護。

3. 熒光染料都存在淬滅的問題，建議染色后盡量當(dāng)天完成檢測。

4. 為減緩熒光淬滅可以使用抗熒光淬滅封片液。