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1.壓力蒸汽滅菌器開蓋。根據指示，提起保險銷，轉動手輪，打開鍋蓋。
2. 壓力蒸汽滅菌器通電。接通與滅菌器標示一致的電源，將控制面板的電源開關開至ON處，面板低水位燈亮，設備報警，顯示鍋內缺水。
3.加水。關閉排汽閥，將純化水注入滅菌器內，至高水位燈亮，設備停止報警，觀察滅菌器滅菌室，當加水過多存水時，打開排汽閥，旋至排水位置，排出多余水量。
4.堆放。將壓力蒸汽滅菌器包扎的滅菌物品放入滅菌器滅菌室中，物品放置留有間隙，依次放入滅菌室內，有利于蒸汽穿透，安全閥排汽口位置必須留出空隙，保障其通暢放汽，防止因放汽閥堵塞未能泄壓，造成鍋體爆裂事故。
5.密封。將鍋蓋放下，將手輪按指示旋轉到底，直至無法轉動，此時密封開關處于接通狀態，關蓋完成。
6. 壓力蒸汽滅菌器設定溫度與時間。滅菌培養基時，應根據培養基的特性，設定不同的滅菌時間與溫度，需注意，不同培養基滅菌溫度與時間不同，不能共同滅菌（不同型號的滅菌器，調節溫度與時間的步驟不同，需根據說明書進行調節）。
7.滅菌。當壓力蒸汽滅菌器溫度與時間設定完畢后，點擊“開始鍵”進行滅菌，此時滅菌器處于鎖定狀態。（自動型滅菌器需保證冷卻水量充足，無需手動排汽；手動型滅菌器，在滅菌初始，需打開排汽閥，排汽，此舉利于滅菌室溫度均衡，升溫至105℃左右時，關閉排汽閥，靜等滅菌器加熱升溫與保溫）。滅菌結束后，滅菌器報警，此時關閉滅菌器。
8.干燥。滅菌結束后，壓力蒸汽滅菌器固體物料可手動打開排汽閥，泄壓，降溫，開鍋，取出滅菌物料；液體物料嚴禁手動排汽降壓降溫，只能等至滅菌器自然降壓、降溫后取出，防止液體爆沸，飛濺。
9.開蓋。壓力蒸汽滅菌器提起保險銷，打開鍋蓋，取出滅菌物料。需注意，開蓋時，設備滅菌室內溫度高，蒸汽充足，防止高溫鍋體與蒸汽燙傷；取物料時應佩戴防燙手套，防止高溫燙傷，同時防止應激反應而污染或摔碎物料。
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