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拿到一根新的色譜柱,首先要做的事情是查看色譜柱的說(shuō)明書(shū),了解色譜柱的基本信息,包括pH值范圍、*高操作溫度、大操作壓力等信息,再查看色譜柱柱效測(cè)試報(bào)告,準(zhǔn)備柱效測(cè)試所用分析物及試劑,然后按以下步驟進(jìn)行色譜柱活化及柱效測(cè)試:
1 液相連接二通,使用新鮮經(jīng)過(guò)濾的水和乙腈或甲醇(根據(jù)測(cè)試報(bào)告中的流動(dòng)相選擇有機(jī)溶劑)沖洗液相系統(tǒng),確保液相系統(tǒng)干凈,不含任何緩沖鹽和污染物。
2 將色譜柱入口端連接到液相系統(tǒng)上,柱出口端先不連接檢測(cè)器,應(yīng)直接連到廢液收集器;色譜柱上有箭頭標(biāo)明正確方向,取用色譜柱時(shí)避免磕碰掉落。
3 在0.1ml/min流速下用乙腈(甲醇)或保存溶劑潤(rùn)洗色譜柱,少2小時(shí),或按照色譜柱說(shuō)明書(shū)上的方法進(jìn)行活化。
4 參照柱效測(cè)試報(bào)告中的方法,更換柱效測(cè)試所用流動(dòng)相,緩慢調(diào)節(jié)流速至柱效測(cè)定流速,平衡色譜柱,至少5-10倍柱體積流動(dòng)相(例如:250×4.6mm 的色譜柱柱體積為 4.2 ml,以 1 ml/min 流速10倍柱體積需要平衡 42 分鐘),直至壓力和基線穩(wěn)定。
5參照柱效測(cè)試報(bào)告中的方法測(cè)試柱效,如果測(cè)試結(jié)果略低于測(cè)試報(bào)告,屬于正常情況,如果結(jié)果明顯偏低、峰形拖尾,說(shuō)明所使用的色譜柱或液相系統(tǒng)處于非理想狀態(tài),需要進(jìn)行排查。
6 記錄測(cè)試方法及結(jié)果,并作為定期柱效測(cè)試的參考值。
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