產品名稱：MTT細胞增殖及細胞毒性檢測試劑盒

內容：    MTT染色液  5ml           Formazan溶解液     55ml

保存條件：MTT染色液需-20℃避光保存；Formazan溶解液可以室溫保存。

產品簡介：

    1.MTT細胞增殖及細胞毒性檢測試劑盒（MTT Cell Proliferation and Cytotoxicity Assay Kit）被廣泛應用于細胞增殖和細胞毒性的實驗方法。由于細胞活力與細胞數呈正相關，因此常常用來檢測細胞的增殖情況。MTT可以被線粒體內的一些脫氫酶還原生成結晶狀的深紫色產物formazan。在特定溶劑存在的情況下，可以被*溶解。然后通過酶標儀可以測定570nm波長附近的吸光度。細胞增殖越多越快，則吸光度越高；細胞毒性越大，則吸光度越低。

        2.本試劑盒采用了*的Formazan溶解液配方，無需去除原有的培養液，可以直接加入Formazan溶解液溶解formazan。從而避免了由于去除培養液時formazan被部分去除而引起的誤差。

        3.本試劑盒背景低，靈敏度高，線性范圍寬，使用方便提高了可靠性。

        4.本產品為500 次（5個96孔細胞培養板）操作。

使用說明：

1.收集對數期細胞，調整細胞懸液濃度，每孔加入100ul，鋪板使待測細胞調密度至1000-10000孔，（邊緣孔用無菌PBS填充）。

2.5%CO2，37℃孵育，至細胞單層鋪滿孔底（96孔平底板，具體每孔所用的細胞的數目，需根據細胞的大小，細胞增殖速度的快慢等決定）。加入濃度梯度的藥物，原則上，細胞貼壁后即可加藥，或兩小時，或半天時間，每孔0-10ul，設3-5個復孔.建議設5個。

3.5%CO2，37℃孵育16-48小時，倒置顯微鏡下觀察。

4.每孔加入10微升MTT染色液，繼續培養4h。若藥物與MTT能夠反應，可先離心后棄去培養液，小心用PBS沖2-3遍后，再加入含MTT的培養液。

5.每孔加入100微升Formanzan溶解液，置搖床上低速振蕩10-30min，使結晶物充分溶解（如果仍有部分formazan未溶解，建議用移液器反復輕輕吹打2-3次避免產生氣泡或孵育溶解）。在酶聯免疫檢測儀570nm測定吸光度。如無570nm濾光片，可以使用560-600nm的濾光片。

6.同時設置調零孔（培養基、MTT染色液、Formanzan溶解液），對照孔（細胞、相同濃度的藥物溶解介質、培養液、MTT染色液、Formanzan溶解液）。

注意事項：

1.由于使用96孔板進行檢測，如果你的細胞要養48 h或更長，建議不要吝嗇96-孔板的四周邊孔，這32個邊孔不能使用，建議加入滅菌PBS以飽和中間64個孔的水分。因為細胞培養過程中，邊孔的水分蒸發很快，培養液及里面的藥物會出現濃縮現象，細胞的狀況就復雜了。

2.MTT溶劑在低溫情況下會凝固，使用前請室溫放置或20-25℃水浴溫育片刻至全部融解后使用。

3.MTT一般4ºC避光保存兩周內有效，保存在-20度長期保存，避免反復凍融，小劑量分裝，用避光袋或是黑紙、錫箔紙包住避光以免分解，尤其當MTT變為灰綠色時就不能再用了。

4.Formazan溶解液結凍或產生沉淀時可以37℃水浴孵育以促進溶解，并且必須在全部溶解并混勻后使用。

5.孵育時，須避光。

6.MTT有致癌性，用的時候小心，有條件帶那種透明的簿膜手套。配成的MTT需要無菌，MTT對菌很敏感。