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描述:
SYBR® Green I 核酸凝膠染料是在瓊脂糖和聚丙烯酰胺凝膠中檢測雙鏈DNA(dsDNA)的zui靈敏的染色法之一。因為SYBR®Green I 對dsDNA更敏感,它特別適用于因存在RNA或ssDNA雜質而導致結果不清楚的情況下的分析。SYBR® Green 染料具有特別低的背景熒光以及嚴格匹配現有儀器的光源與過濾裝置的光譜特征,因此它非常適合與激光掃描儀一同使用。SYBR®Green I 能夠:
· ü 在檢測瓊脂凝膠中的DNA時,其靈敏度比溴化乙錠至少高25倍(見圖A)
· ü 易于使用-凝膠浸泡在稀釋的染料中,無需脫色即可顯影
· ü 兼容紫外透射儀、凝膠記錄系統和激光掃描儀
· ü 可用于多種反應,包括DNA分型、PCR分析、DNA損傷分析、復合樣品分析和實時PCR檢測
組分與儲存:
SYBR® Green I 核酸凝膠染料以溶于DMSO的10,000倍濃縮液的
形式提供。
在-20℃條件下干燥避光冷凍保存。
訂購信息:
產品名稱 貨號 規格 目錄價(RMB)
SYBR(R) Green I Nucleic(進口分裝) CS7561 100ul 560
SYBR(R) Green I Nucleic(進口分裝) CS7562 200ul 1050
SYBR(R) Green I Nucleic(進口分裝) CS7563 500ul 2200
電泳用SYBR Green I 使用方法
SYBR Green I預染方法
1. 該方法適于瓊脂糖凝膠電泳和PAGE凝膠電泳
2. 工作液的配制:用電泳緩沖液將10000×的SYBR GreenⅠ稀釋100倍,即為SYBR GreenⅠ工作液。SYBR GreenⅠ工作液可以置2-8℃冷藏一個月以上。
3. 制膠:按常規方法制膠,不含任何染料。
4. 樣品染色:向分析樣品中加入SYBR GreenⅠ工作液和載樣緩沖液,室溫放置10分鐘,使SYBR GreenⅠ與樣品中DNA充分結合。SYBR GreenⅠ工作液加入量為總上樣量的1/10。
5. DNA Marker染色:將5μL DNA Marker和1μLSYBR GreenⅠ工作液混勻,室溫放置5分鐘,使SYBR GreenⅠ與DNA充分結合。
6. 上樣、電泳:按常規操作。
SYBR Green I后染方法
1. 按照常規方法進行電泳。
2. 用PH 7.0 - 8.5 的緩沖液(如:TAE,TBE 或 TE),按照10000:1的比例稀釋SYBR GreenⅠ濃縮液,混勻,制成染色溶液。
3. 將染色溶液倒入合適的聚丙烯容器中,放入凝膠,用鋁箔等蓋住容器使染料避光。室溫振蕩染色10-30分鐘,染色時間因凝膠濃度和厚度而定。聚丙烯酰胺凝膠直接在玻璃平皿上染色,將配好的工作溶液輕輕地倒在膠板上,讓工作液均勻地覆蓋整個膠板,并染色30分鐘。玻璃平皿必須預先經過硅烷化溶液處理(避免染料吸附在玻璃表面上)。
4. 用藍盾TM觀測。藍光可透過玻璃,觀測聚丙烯酰胺凝膠時,可直接將托有凝膠的玻璃平皿放入藍盾TM內觀測。
SYBR Green I使用注意事項
1. 在"SYBR GreenⅠ預染色方法"中,電泳時間不要超過2小時,否則SYBR GreenⅠ會從DNA上分離出來,會產生彌散狀條帶。
2. 在常規用酒精沉淀核酸的過程中,SYBR Green I 可以全部從雙鏈核酸上去掉。
3. 如果想對用 SYBR Green I 染過的膠進行 Southern blots,建議在預雜化和雜化溶液中加入 0.1%- 0.3% 的SDS。
4. 在紫外照射透視下,與雙鏈 DNA 接合的 SYBR Green I 呈現綠色熒光。如果膠中含有單鏈 DNA 則顏色為橘黃而不是綠色。
5. SYBR Green 對玻璃和非聚丙烯材料具有一定親合力。建議在稀釋、貯存、染色等使用過程中用聚丙烯類容器。