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上海島韓實業有限公司
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造血祖細胞的培養離不開二氧化碳培養箱
2016-2-24 閱讀(878)
造血祖細胞的概念是1978年由美國、加溫度越高則溶解度越低。所以在室溫條件己經拿大等門個國家的實驗血液學家提出,調節過的液體培養基放到37aC的培養箱里,繼之造血祖細胞的培養技術pH值可隨溫度升高而升高,其升高的程度與也得到廣泛的應用。目前,應用細胞培養技術氣相液相的比例有關,經驗值為0.Zto.4之間。已成為許多科研工作的手段和基礎。造血祖細胞的培養離不開二氧化碳培養箱的應用,HH.CP-T(80升)二氧化碳培養箱是上海島韓實業有限公司生產的，其對造血祖細胞培養的影響有許多方面, 主要有以下幾點。
一、二氧化碳(C 0 2)濃度細胞生存、代謝、增殖、分化于培養體系中, 首先需要穩定的pH環境, 目前, 造血祖細胞培養體系的p H 多用二氧化碳一碳酸氫鈉(C 0 2 一N aH C 0 3)緩沖液系統控制[2] , 如果c o Z 濃度保持恒定, 則pH 值與N aH C O 3 濃度的對數成比例,N 州C O 3 量增加10倍, 則pH 值上升1.0 ; N aH CO3 量減至1/2 ,則pH 值下降0.3。在二氧化碳培養箱的密閉體系中, 培養液中的pH 變化受下列因素影響:1 液相中的N aH CO 3 濃度; o氣相中的C O Z ;? 氣相與液相兩者容積的比例; ? 細胞數及使用細胞種類的乳酸的產生量。
C O : 氣體對液體的溶解度與溫度有影響,溫度越高則溶解度越低。所以在室溫條件己經調節過的液體培養基放到37 ℃ 的培養箱里, 其pH 值可隨溫度升高而升高, 其升高的程度與氣相液相的比例有關, 經驗值為0. 2刁.4 之間。如果培養箱內植入培養的細胞, 由于細胞呼吸產生c o Z , 糖分解后產生乳酸, 在產生1m ol的乳酸的同時, 乳酸作用于液相中的N aH c O 。,則發生lm ol 量的c o Z , c o : 發生后立即移行于氣相中, 此時N aH C O 3 即產生緩沖作用, 如果細胞數太多, 產生乳酸量超過N aH C O 3 的中和能力, 則液相的pH 下降。
培養體系中造血細胞濃度較低, 由于細胞二、濕度造血祖細胞*的生長濕度是10 % , 如果能保持c o : 培養箱內的水分, 一般均能維持造血祖細胞生長所需的濕度, 如果C O : 培養箱內的水分蒸發消耗掉, 造血祖細胞的生長會停止或死亡, 因此, 應定期檢查C O Z培養箱內的水分, 及時補充。
二、溫度*的溫度是37 ℃ , 適宜的溫度是造血祖細胞生長所必需的, 溫度過高過低會直接影響造血祖細胞的生長, 另外, 溫度也影響C O : 的在液體的溶解度, 溫度越高, 則溶解度降低, 通過pH 值的波動來影響造血祖細胞的生長。
討論
影響體外造血祖細胞生長的因素很多, 例如細胞種類、培養基、培養器械、分化誘導因子等Izj , 就c o : 培養箱而言, 主要的是以上提及的3 個因素, 其中濕度和溫度較穩定, 發生故障的機會不多, 而影響C q 濃度的因素較多, 因此, 多數c o : 培養箱的毛病出在此參數。的代謝產物不致使培養體系中的pH 發生巨大的變化, 用c O Z一N aH c o 3 緩沖體系足以控制其p H , 若培養液內11. 6 m m o 比濃度的N 州C O 3 ,則*的C O : 濃度是5% , 可使pH 經常保持在7. 3 左右, 一般pH 低于7. 0 則細胞的代謝活性低下。如果C O : 濃度顯示達不到5% 時, 首先檢查C O : 氣罐是否有氣體, 如果沒有, 應馬上予以更換;其次是C O : 入口及其通道是否阻塞, 這些部位往往是較易發生故障和難于發現的, zui簡單的檢查和修理方法是用lo ml 的注射器來回抽吸或灌氣, 對于輕度堵塞可以解決問題。另外的原因是控制C O : 的微處理器出毛病, 出現這種情況時需請專業人員進行修理。
還有一種情況也是在實際工作中經常見到的,就是C O : 培養箱的C O : 濃度數字已顯示己達5% , 但培養基仍不能維持理想的pH 值, 究其原因可能有以下幾點: 1 c o : 培養箱的c o : 濃度數字與實際的c o : 濃度不符; oc o : 培養箱門未關閉好; C O : 培養箱開門次數過多, C q濃度難于達到造血祖細胞的培養要求。
