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技術(shù)文章

人白細胞介素1β試劑盒操作步驟

閱讀:1598          發(fā)布時間:2011-9-21

     人白細胞介素1β試劑盒操作步驟

 

本試劑盒僅供研究使用。
檢測范圍:                                                          96T
1pg/ml-40pg/ml
 
使用目的:
人白細胞介素1β試劑盒用于測定人血清、唾液及相關(guān)液體樣本中白細胞介素1β(IL-1β)含量。
實驗原理
人白細胞介素1β試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標本中人白細胞介素1β(IL-1β)水平。用純化的人白細胞介素1β(IL-1β)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入白細胞介素1β(IL-1β),再與HRP標記的白細胞介素1β(IL-1β)抗體結(jié)合,形成抗體-抗原-酶標抗體復(fù)合物,經(jīng)過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的白細胞介素1β(IL-1β)呈正相關(guān)。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標準曲線計算樣品中人白細胞介素1β(IL-1β)濃度。  
人白細胞介素1β試劑盒操作步驟
1.         標準品的稀釋:本試劑盒提供原倍標準品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。

40pg/ml
5號標準品
150μl的原倍標準品加入150μl標準品稀釋液
20pg/ml
4號標準品
150μl的5號標準品加入150μl標準品稀釋液
10pg/ml
3號標準品
150μl的4號標準品加入150μl標準品稀釋液
5pg/ml
2號標準品
150μl的3號標準品加入150μl標準品稀釋液
2.5pg/ml
1號標準品
150μl的2號標準品加入150μl標準品稀釋液

 2.         加樣:分別設(shè)空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl,待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl(樣品zui終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。
3.         溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。  
4.         配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用
5.         洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復(fù)5次,拍干。
6.         加酶:每孔加入酶標試劑50μl,空白孔除外。
7.         溫育:操作同3。
8.         洗滌:操作同5。
9.         顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.
10.     終止:每孔加終止液50μl,終止反應(yīng)(此時藍色立轉(zhuǎn)黃色)。
11.     測定:以空白空調(diào)零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行。
保存條件及有效期
1.人白細胞介素1β試劑盒保存:;2-8。
2.有效期:6個月
 
     http://www.gbdelisa.com

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