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大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞的轉(zhuǎn)化

時間:2011-12-27閱讀:2426

大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞的轉(zhuǎn)化
轉(zhuǎn)化過程所用的受體細(xì)胞一般是限制修飾系統(tǒng)缺陷的變異株,即不含限制性內(nèi)切酶和甲基化酶的突變體(Rˉ,Mˉ),它可以容忍外源DNA分子進入體內(nèi)并穩(wěn)定地遺傳給后代。受體細(xì)胞經(jīng)過一些特殊方法(如電擊法,CaCl2,RbCl(KCl)等化學(xué)試劑法)的處理后,細(xì)胞膜的通透性發(fā)生了暫時性的改變,成為能允許外源DNA分子進入的感受態(tài)細(xì)胞 (Compenent cells)。進入受體細(xì)胞的DNA分子通過復(fù)制,表達實現(xiàn)遺傳信息的轉(zhuǎn)移,使受體細(xì)胞出現(xiàn)新的遺傳性狀。將經(jīng)過轉(zhuǎn)化后的細(xì)胞在篩選培養(yǎng)基中培養(yǎng),即可篩選出轉(zhuǎn)化子(Transformant,即帶有異源DNA分子的受體細(xì)胞 )。目前常用的感受態(tài)細(xì)胞制備方法有CaCl2和RbCl(KCl)法,RbCl(KCl)法制備的感受態(tài)細(xì)胞轉(zhuǎn)化效率較高,但CaCl2法簡便易行,且其轉(zhuǎn)化效率*可以滿足一般實驗的要求,制備出的感受態(tài)細(xì)胞暫時不用時,可加入占總體積15%的無菌甘油于-70℃保存(半年),因此CaCl2法為使用更廣泛。
大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞的轉(zhuǎn)化
 

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