目錄:北京索萊寶科技有限公司>>生化檢測試劑盒-常量法>>其它系列>> BC5390-50T/24S半胱氨酰亞砜裂解酶活性檢測試劑盒 其它
| CAS | 詳詢 | 純度 | 詳詢 |
|---|---|---|---|
| 分子量 | 詳詢 | 分子式 | 詳詢 |
| 供貨周期 | 現貨 | 規格 | 50T/24S |
| 貨號 | BC5390 | 應用領域 | 環保,化工,生物產業,農林牧漁,綜合 |
| 主要用途 | 半胱氨酰亞砜裂解酶活性檢測 |
半胱氨酰亞砜裂解酶（CSL）活性檢測試劑盒說明書
可見分光光度法
貨號：BC5390
規格：50T/24S
產品內容：使用前請認真核對試劑體積與瓶內體積是否一致，有疑問請及時聯系索萊寶工作人員。
試劑名稱 | 規格 | 保存條件 |
提取液 | 液體30 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
試劑一 | 液體3.5 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
試劑二 | 粉劑×1瓶 | 2-8℃保存 |
試劑三 | 液體7 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
試劑四 | 液體7 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
試劑五 | 液體35 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
標準品 | 液體1 mL×1支 | 2-8℃保存 |
溶液的配制：
1、 試劑二：試劑放于試劑瓶內EP管中。臨用前加入4 mL蒸餾水溶解，-20℃分裝可保存4周，避免反復凍融。
2、 試劑二工作液：臨用前根據樣本量將試劑二用蒸餾水稀釋5000倍，現用現配。
3、 標準品：20μmol/mL 丙酮酸鈉標準液。
4、 0.625μmol/mL丙酮酸鈉標準液的配制：臨用前取30μL的20μmol/mL 標準液于EP管中，加入930μL蒸餾水充分溶解，配制成0.625μmol/mL的丙酮酸鈉標準液備用。
產品說明：
半胱氨酰亞砜裂解酶，簡稱蒜酶，又名蒜氨酸酶。半胱氨酰亞砜裂解酶幾乎存在于所有蔥屬植物中，如大蒜，洋蔥，韭菜等。蒜氨酸酶存在于液泡內，其天然底物蒜氨酸存在于細胞質中；蒜氨酸酶與蒜氨酸接觸并催化產生蒜素和順、反式阿霍烯并生成丙酮酸和氨等副產物，也是大蒜等植物辛辣氣味的主要來源。
半胱酰胺亞砜裂解酶可以催化S-甲基-L-半胱*酸亞砜生成丙酮酸。丙酮酸可與2,4-二硝*苯肼反應生成2,4-二硝*苯腙，在堿性條件下顯棕紅色；測定505nm吸光度的變化，即可計算CSL酶活性。
注意：實驗之前建議選擇2-3個預期差異大的樣本做預實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內建議稀釋或者增加樣本量進行檢測。
需自備的儀器和用品：
可見分光光度計、水浴鍋/恒溫培養箱、臺式離心機、可調式移液器、1mL玻璃比色皿、研缽/勻漿器、蒸餾水和冰。
操作步驟：
一、 樣本處理（可適當調整待測樣本量，具體比例可以參考文獻）
1. 組織樣本：按照組織質量（g）：提取液體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL提取液），進行冰浴勻漿，4℃浸提30分鐘。12000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。
2. 液體樣本：直接測定。(若溶液呈現渾濁，則離心取上清后再測定)。
二、測定步驟
1、 可見分光光度計預熱30min以上，調節波長至505nm，用蒸餾水調零。
2、操作表（1.5mLEP管內操作）：
試劑名稱（μL） | 測定管 | 對照管 | 標準管 | 標準空白管 |
樣本 | 100 | 100 | - | - |
標準品 | - | - | 100 | - |
試劑一 | 100 | - | - | - |
試劑二工作液 | 100 | 100 | 100 | 100 |
蒸餾水 | - | 100 | 100 | 200 |
混勻后，37℃反應30min | ||||
試劑三 | 100 | 100 | 100 | 100 |
試劑四 | 100 | 100 | 100 | 100 |
混勻后，37℃反應30min | ||||
試劑五 | 500 | 500 | 500 | 500 |
混勻，室溫放置10min，于1mL玻璃比色皿內測定505nm波長處的吸光度。記作A測定，A對照，A標準，A標準空白。?A測定=A測定-A對照，?A標準=A標準-A標準空白。（標準管和標準空白管只需做1-2次。）
三、CSL活性計算
(1) 按樣本蛋白濃度計算
單位的定義：37℃，每mg組織蛋白每分鐘催化產生1μmol 丙酮酸定義為一個酶活力單位。
CSL活性（U/mg prot）=（?A測定×C標準÷?A標準）×V樣÷（V樣×Cpr）÷T×F=0.0208×?A測定÷?A標準÷Cpr ×F
(2) 按樣本質量計算
單位的定義：37℃，每g組織每分鐘催化產生1μmol 丙酮酸定義為一個酶活力單位。
CSL活性（U/g 質量）=（?A測定×C標準÷?A標準）×V樣÷（V樣÷V樣總×W）÷T×F=0.0208×?A測定÷?A標準÷W×F
(3) 按血清（漿）等液體體積計算
單位的定義：每mL血清（漿）等液體每分鐘催化產生1μmol 丙酮酸定義為一個酶活力單位。
CSL活性（U/mL）=（?A測定×C標準÷?A標準）×V樣÷V樣÷T×F=0.0208×?A測定÷?A標準×F
C標準: 丙酮酸鈉標準液的濃度，0.625μmol/mL；V樣：反應體系中加入的樣本體積，0.1mL；V樣總：加入的提取液體積，1mL；T：反應時間，30min；Cpr：蛋白質濃度，mg/mL；W：樣本質量，g；F：樣本稀釋倍數。
注意事項：
1. 如果測定結果?A測定＞1，可以對樣本用蒸餾水進行稀釋或者縮短第一步反應時間；吸光值較小，可以加大樣本量或者延長第一步反應時間至1h或者更長時間。注意計算時同步修改計算公式。
2. 對于初次測定樣本，建議將樣本勻漿液用蒸餾水進行梯度稀釋后測定，選取最佳的稀釋倍數。洋蔥、香菇、大蒜類樣本建議直接稀釋4-10倍后再進行最佳稀釋倍數摸索。（實驗室洋蔥進行了8倍稀釋，蒜進行了64倍稀釋）
實驗實例：
1、 稱取0.1233g蒜樣本，加入提取液進行冰浴勻漿，對上清用蒸餾水稀釋64倍，按照測定步驟操作，用1mL玻璃比色皿測得計算?A測定=A測定-A對照=0.689-0.184=0.505，?A標準=A標準-A標準空白=0.738-0.026=0.712，帶入公式計算：
CSL活性（U/g 質量）= 0.0208×?A測定÷?A標準÷W×F=7.658 U/g 質量。
2、 稱取0.1263g洋蔥樣本，加入提取液進行冰浴勻漿，對上清稀釋4倍，按照測定步驟操作，用1mL玻璃比色皿測得計算?A測定=A測定-A對照=0.66-0.411=0.249，?A標準=A標準-A標準空白=0.738-0.026=0.712，帶入公式計算：
CSL活性（U/g 質量）= 0.0208×?A測定÷?A標準÷W×F=0.230 U/g 質量。
參考文獻：
[1] Su Qianqian, Tang Jing, Zhao Liyan, et al. Effects of nanocomposite packaging on the quality and formaldehyde content of shiitake mushrooms during storage [J]. Food Science, 2015(8):6.
[2] Kumagai H, ?Hidetoshi KONO, Sakurai H, et al. Comparison of C-S Lyase in Lentinus edodes and Allium sativum [J]. Bioscience, Biotechnology, and Biochemistry, 2022(66): 2560–2566.
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