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目錄:北京索萊寶科技有限公司>>生化檢測試劑盒-常量法>>其它系列>> BC5390-50T/24S半胱氨酰亞砜裂解酶活性檢測試劑盒 其它

半胱氨酰亞砜裂解酶活性檢測試劑盒 其它
  • 半胱氨酰亞砜裂解酶活性檢測試劑盒 其它
參考價 面議
具體成交價以合同協議為準
參考價 面議
具體成交價以合同協議為準
  • 品牌 SOLARBIO/索萊寶
  • 型號 BC5390-50T/24S
  • 廠商性質 生產商
  • 產品資料 查看pdf文檔
  • 所在地 北京市
屬性

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更新時間:2024-04-19 13:26:41瀏覽次數:738評價

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CAS 詳詢 純度 詳詢
分子量 詳詢 分子式 詳詢
供貨周期 現貨 規格 50T/24S
貨號 BC5390 應用領域 環保,化工,生物產業,農林牧漁,綜合
主要用途 半胱氨酰亞砜裂解酶活性檢測
半胱氨酰亞砜裂解酶活性檢測試劑盒 其它
有效期
6個月
儲存條件
2-8℃
單位

英文名稱
Cysteinyl Sulfoxide Lyase (CSL)Activity Assay Kit
檢測方法
可見分光光度法 Spectrophotometer
規格
50T/24S

半胱氨酰亞砜裂解酶(CSL)活性檢測試劑盒說明書

可見分光光度法

貨號:BC5390

規格:50T/24S

產品內容:使用前請認真核對試劑體積與瓶內體積是否一致,有疑問請及時聯系索萊寶工作人員。

試劑名稱

規格

保存條件

提取液

液體30 mL×1

2-8℃保存

試劑一

液體3.5 mL×1

2-8℃保存

試劑二

粉劑×1

2-8℃保存

試劑三

液體7 mL×1

2-8℃保存

試劑四

液體7 mL×1

2-8℃保存

試劑五

液體35 mL×1

2-8℃保存

標準品

液體1 mL×1

2-8℃保存

溶液的配制:

1、 試劑二:試劑放于試劑瓶內EP管中。臨用前加入4 mL蒸餾水溶解,-20分裝可保存4周,避免反復凍融

2、 試劑二工作液:臨用前根據樣本量將試劑二用蒸餾水稀釋5000倍,現用現配。

3、 標準品:20μmol/mL 丙酮酸鈉標準液。

4、 0.625μmol/mL丙酮酸鈉標準液的配制:臨用前取30μL20μmol/mL 標準液EP管中,加入930μL蒸餾水充分溶解,配制成0.625μmol/mL丙酮酸鈉標準液備用。

產品說明:

半胱氨酰亞砜裂解酶,簡稱蒜酶,又名蒜氨酸酶。半胱氨酰亞砜裂解酶幾乎存在于所有蔥屬植物中,如大蒜,洋蔥,韭菜等。蒜氨酸酶存在于液泡內,其天然底物蒜氨酸存在于細胞質中;蒜氨酸酶與蒜氨酸接觸并催化產生蒜素和順、反式阿霍烯并生成丙酮酸和氨等副產物,也是大蒜等植物辛辣氣味的主要來源。

半胱酰胺亞砜裂解酶可以催化S-甲基-L-半胱*酸亞砜生成丙酮酸。丙酮酸可與2,4-二硝*苯肼反應生成2,4-二硝*苯腙,在堿性條件下顯棕紅色;測定505nm吸光度的變化,即可計算CSL酶活性。


注意:實驗之前建議選擇2-3個預期差異大的樣本做預實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內建議稀釋或者增加樣本量進行檢測。

需自備的儀器和用品:

可見分光光度計、水浴鍋/恒溫培養箱、臺式離心機、可調式移液器、1mL玻璃比色皿、研缽/勻漿器、蒸餾水和冰。

操作步驟:

 

一、 樣本處理(可適當調整待測樣本量,具體比例可以參考文獻)

1. 組織樣本:按照組織質量(g):提取液體積(mL)15~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL提取液),進行冰浴勻漿,4℃浸提30分鐘。12000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測。

2. 液體樣本:直接測定。(若溶液呈現渾濁,則離心取上清后再測定)

二、測定步驟

1、 可見分光光度計預熱30min以上,調節波長至505nm,用蒸餾水調零。

2、操作表(1.5mLEP管內操作):

試劑名稱(μL

測定管

對照管

標準管

標準空白管

樣本

100

100

-

-

標準品

-

-

100

-

試劑一

100

-

-

-

試劑二工作液

100

100

100

100

蒸餾水

-

100

100

200

混勻后,37℃反應30min

試劑三

100

100

100

100

試劑四

100

100

100

100

混勻后,37℃反應30min

試劑五

500

500

500

500

混勻,室溫放置10min,于1mL玻璃比色皿內測定505nm波長處的吸光度。記作A測定A對照A標準A標準空白?A測定=A測定-A對照?A標準=A標準-A標準空白。(標準管和標準空白管只需做1-2次。)

三、CSL活性計算

(1) 按樣本蛋白濃度計算

單位的定義:37℃,每mg組織蛋白每分鐘催化產生1μmol 丙酮酸定義為一個酶活力單位。

CSL活性(U/mg prot=?A測定×C標準÷?A標準×V÷V×Cpr÷T×F=0.0208×?A測定÷?A標準÷Cpr ×F

(2) 按樣本質量計算

單位的定義:37℃,每g組織每分鐘催化產生1μmol 丙酮酸定義為一個酶活力單位。

CSL活性(U/g 質量)=?A測定×C標準÷?A標準×V÷V÷V樣總×W÷T×F=0.0208×?A測定÷?A標準÷W×F

(3) 按血清(漿)等液體體積計算

單位的定義:每mL血清(漿)等液體每分鐘催化產生1μmol 丙酮酸定義為一個酶活力單位。

CSL活性(U/mL=?A測定×C標準÷?A標準×V÷V÷T×F=0.0208×?A測定÷?A標準×F

C標準: 丙酮酸鈉標準液的濃度,0.625μmol/mLV:反應體系中加入的樣本體積,0.1mLV樣總:加入的提取液體積,1mLT:反應時間,30minCpr:蛋白質濃度,mg/mLW:樣本質量,gF:樣本稀釋倍數。

注意事項:

1. 如果測定結果?A測定1,可以對樣本用蒸餾水進行稀釋或者縮短第一步反應時間;吸光值較小,可以加大樣本量或者延長第一步反應時間至1h或者更長時間。注意計算時同步修改計算公式。

2. 對于初次測定樣本,建議將樣本勻漿液用蒸餾水進行梯度稀釋后測定,選取最佳的稀釋倍數。洋蔥、香菇、大蒜類樣本建議直接稀釋4-10倍后再進行最佳稀釋倍數摸索。(實驗室洋蔥進行了8倍稀釋,蒜進行了64倍稀釋)

實驗實例:

1、 稱取0.1233g樣本加入提取液進行冰浴勻漿,對上清用蒸餾水稀釋64倍,按照測定步驟操作,用1mL玻璃比色皿測得計算?A測定=A測定-A對照=0.689-0.184=0.505?A標準=A標準-A標準空白=0.738-0.026=0.712帶入公式計算:

CSL活性(U/g 質量)= 0.0208×?A測定÷?A標準÷W×F=7.658 U/g 質量。

2、 稱取0.1263g洋蔥樣本,加入提取液進行冰浴勻漿,對上清稀釋4倍,按照測定步驟操作,用1mL玻璃比色皿測得計算?A測定=A測定-A對照=0.66-0.411=0.249?A標準=A標準-A標準空白=0.738-0.026=0.712帶入公式計算:

CSL活性(U/g 質量)= 0.0208×?A測定÷?A標準÷W×F=0.230 U/g 質量。

參考文獻:

[1] Su Qianqian, Tang Jing, Zhao Liyan, et al. Effects of nanocomposite packaging on the quality and formaldehyde content of shiitake mushrooms during storage [J]. Food Science, 2015(8):6.

[2] Kumagai H, ?Hidetoshi KONO, Sakurai H, et al. Comparison of C-S Lyase in Lentinus edodes and Allium sativum [J]. Bioscience, Biotechnology, and Biochemistry, 2022(66): 2560–2566. 

半胱氨酰亞砜裂解酶活性檢測試劑盒 其它 半胱氨酰亞砜裂解酶活性檢測試劑盒 其它

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