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目錄:北京索萊寶科技有限公司>>生化檢測試劑盒-常量法>>其它系列>> BC4170-50T/48S肉桂醇脫氫酶活性檢測試劑盒 其他系列

肉桂醇脫氫酶活性檢測試劑盒 其他系列
  • 肉桂醇脫氫酶活性檢測試劑盒 其他系列
參考價 面議
具體成交價以合同協議為準
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具體成交價以合同協議為準
  • 品牌 SOLARBIO/索萊寶
  • 型號 BC4170-50T/48S
  • 廠商性質 生產商
  • 產品資料 查看pdf文檔
  • 所在地 北京市
屬性

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更新時間:2024-04-12 15:13:29瀏覽次數:798評價

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CAS 詳詢 純度 詳詢
分子量 詳詢 分子式 詳詢
供貨周期 現貨 規格 50T/48S
貨號 BC4170 應用領域 環保,化工,生物產業,農林牧漁,綜合
主要用途 肉桂醇脫氫酶(CAD)活性檢測
儲存條件
-20℃
中文名稱
肉桂醇脫氫酶活性檢測試劑盒 其他系列
有效期
6個月
單位

英文名稱
Cinnamyl Alcohol dehydrogenase Dehydrogenase(CAD) Activity Assay Kit
檢測方法
紫外分光光度法 Spectrophotometer
規格
50T/48S
自備試劑
該試劑盒實驗過程中需自備試劑,詳情見網站說明書


肉桂醇脫氫酶(CAD)活性檢測試劑盒說明書
紫外分光光度法
貨號:BC4170
規格:50T/48S
產品組成:使用前請認真核對試劑體積與瓶內體積是否一致,有疑問請及時聯系索萊寶工作人員。

試劑名稱規格保存條件
提取液液體60 mL×1瓶2-8℃保存
試劑一粉劑×1-20℃保存
試劑二液體×12-8℃保存
試劑三液體50 mL×1瓶2-8℃保存

溶液的配制:

  1. 提取液:內含不溶物,使用前搖勻。

  2. 試劑一:臨用前加入15 mL試劑三溶解。可溶解后分裝-20保存,避免反復凍融。

  3. 試劑二:液體置于試劑瓶內玻璃管中。臨用前加入15 mL乙醇充分混勻,配好后2-8℃保存。

  4. 工作液的配制:將試劑一、試劑二、試劑三按1:1:2(V:V:V)的比例配制工作液,工作液現用現配。

產品說明:
CAD 是木質素生物合成途徑中的關鍵酶之一,催化香豆醛、芥子醛以及松柏醛等生成與之相應的肉桂醇。該酶多存在于高等植物、酵母、菌類中,研究該酶可以探討多種生物細胞發育過程中木質素沉積的代謝機理,為減少水果石細胞含量提高其品質提供依據。
CAD 催化肉桂醛和NADPH生成肉桂醇和NADP+,在340nm下測定NADPH消耗速率,即可反映CAD活性。

注意:實驗之前建議選擇2-3個預期差異大的樣本做預實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內建議稀釋或者增加樣本量進行檢測。
需自備的儀器和用品:
紫外分光光度計、低溫離心機、水浴鍋、1mL石英比色皿、可調式移液槍、研缽/勻漿器、冰、乙醇和蒸餾水。
操作步驟:
一、樣本處理(可適當調整待測樣本量,具體比例可以參考文獻)
1、組織:按照組織質量(g):提取液體積(mL)15~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL提取液)進行冰浴勻漿,然后10000g4℃,離心10min,取上清,置冰上待測。
2、細菌或培養細胞:先收集細菌或細胞到離心管內,離心后棄上清;按照細菌或細胞數量(104個):提取液體積(mL)為500~10001的比例(建議500萬細菌或細胞加入1mL提取液),超聲波破碎細菌或細胞(冰浴,功率200W,超聲3s,間隔10s,重復30次);10000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測。
二、測定步驟

  1. 紫外分光光度計預熱30min以上,調節波長至340nm,蒸餾水調零。

  2. 操作表:在1mL石英比色皿中分別加入下列試劑:

試劑名稱空白管測定管
樣本(µL)-100
蒸餾水(µL)100-
工作液(µL)900900
在1mL石英比色皿中分別加入上述試劑,充分混勻后于340nm處測定10s時的吸光值A1,迅速置于25℃水浴5min,拿出迅速擦干測定5min10s時的吸光值A2,計算ΔA測定管= A1測定-A2測定,ΔA空白管=A1空白-A2空白,ΔA=ΔA測定管-ΔA空白管(空白管只需做1-2次)。

三、CAD酶活計算

  1. 按蛋白濃度計算

酶活定義:每mg組織蛋白每分鐘消耗1nmolNADPH定義為一個酶活力單位。
CAD酶活(U/mg prot=ΔA÷ε×d×109×V反總÷V×Cpr÷T=321.54×ΔA÷Cpr

  1. 按樣本質量計算

酶活定義:每g組織每分鐘消耗1nmolNADPH定義為一個酶活力單位。
CAD酶活(U/g 質量)=ΔA÷ε×d×109×V反總÷(V樣×W÷V樣總)÷T=321.54×ΔA÷W

  1. 按細菌或細胞數量計算

酶活定義:每104個細菌或細胞每分鐘消耗1nmol的NADPH定義為一個酶活力單位。
CAD酶活(U/104 cell)=ΔA÷ε×d×109×V反總÷500×V÷V樣總)÷T=0.643×ΔA
εNADPH摩爾消光系數,6.22×103 L/mol /cm;d:比色皿光徑,1cmV反總:反應體系總體積,0.001LV樣:反應體系中樣本體積,0.1mLV樣總:加入提取液體積,1mLCpr:樣本蛋白濃度,mg/mL,蛋白濃度自行測定;W:樣本質量,gT:反應時間,5min500:細菌或細胞總數,500萬;109:單位換算系數,1mol=109nmol。
注意事項:
1、當A1小于0.8,建議將樣本用蒸餾水稀釋后再進行測定。
2、空白管為檢測各試劑組分質量的檢測孔,正常情況下,變化不超過0.04
實驗實例:

  1. 取約0.1g三葉草葉,加入1mL提取液進行冰浴勻漿,然后10000g4℃,離心10min,取上清,按照測定步驟操作,測定計算ΔA測定管= A1測定-A2測定=1.532-1.462=0.07ΔA空白管=A1空白-A2空白=1.012-1.007=0.005ΔA=ΔA測定管-ΔA空白管=0.07-0.005=0.065,按樣本質量計算得:CAD酶活(U/g 質量)=321.54×ΔA÷W=209.001 U/g 質量。

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