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羥自由基清
除能力檢測試劑盒說明書
微量法
貨號：BC1325
規格：100T/96S
產品組成：使用前請認真核對試劑體積與瓶內體積是否一致，有疑問請及時聯系索萊寶工作人員。

溶液的配制：

1. 試劑四：試劑放于試劑瓶內EP管中。臨用前加入9.84 mL蒸餾水混勻，也可按比例現用現配，配好的試劑2-8℃保存4周。

產品說明：
羥自由基是人體在新陳代謝過程中產生的對生物體毒性強、危害大的一種自由基。它可以使組織中的糖類、氨基酸、蛋白質、核酸等物質發生氧化，遭受氧化性損傷和破壞，導致細胞壞死或突變。羥自由基清除能力是樣本抗氧化能力的重要指標之一，在抗氧化類保健品和藥品研究中得到廣泛應用。
H₂O₂/Fe²⁺通過Fenton反應產生羥自由基，將鄰二氮菲-Fe²⁺水溶液中Fe²⁺氧化為Fe³⁺，導致536nm的吸光度下降，樣本536nm吸光度下降速率的抑制程度，反映了樣本清除羥自由基的能力。

注意：實驗之前建議選擇2-3個預期差異大的樣本做預實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內建議稀釋或者增加樣本量進行檢測。
需自備的儀器和用品：
可見分光光度計/酶標儀、微量玻璃比色皿/96孔板、天平、低溫離心機、水浴鍋/恒溫培養箱、可調式移液槍、研缽/勻漿器、冰和蒸餾水。
操作步驟：具體操作步驟詳見“產品資料"附件
注意事項:

1. 為了比較不同樣本羥自由基清除能力，對于同一批樣本必須加入等量的樣本，血清、組織勻漿、果汁等液體樣本加入同樣體積，提取物（或者藥物）配制成同樣濃度。

2. 樣本過多時，可以按體積比試劑一：試劑二：試劑三=0.05：0.1：0.1的比例配制工作液，現用現配。

實驗實例：

1. 取0.1g脾臟加入1mL提取液進行勻漿研磨，取上清后按照測定步驟操作，用96孔板測得計算：羥自由基清除率D%=（A測-A對）÷（A空-A對）×100%=(0.77-0.222)÷(0.884-0.222)×100%=82.78%。

2. 取0.1g稗草葉加入1mL提取液進行勻漿研磨，取上清后按照測定步驟操作，用96孔板測得計算：羥自由基清除率D%=（A測-A對）÷（A空-A對）×100%=(0.698-0.222)÷(0.884-0.222)×100%=71.9%。

3. 取兔血清后按照測定步驟操作，用96孔板測得計算：羥自由基清除率D%=（A測-A對）÷（A空-A對）×100%=(0.553-0.222)÷(0.884-0.222)×100%=50%。

相關發表文獻：

1. Hu J, Wang Q, Wang Y, et al. Polydopamine-Based Surface Modification of Hemoglobin Particles for Stability Enhancement of Oxygen Carriers[J]. Journal of Colloid and Interface Science, 2020.

2. Liang R, Zhao J, Li B, et al. Implantable and degradable antioxidant poly (ε-caprolactone)-lignin nanofiber membrane for effective osteoarthritis treatment[J]. Biomaterials, 2020, 230: 119601.

3. Yang Y, Liu M, Wang K, et al. Chemical and cytological evaluation of honeybee pollen antioxidant ability[J]. Journal of Food Science, 2020, 85(3): 824-833.

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