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二氧化碳培養箱的氣路由高濃度的二氧化碳鋼瓶、氣泵、穩壓閥、針型閥，電磁閥、流量計及儲氣瓶等組成。(高濃度的二氧化碳鋼瓶由用戶自備)。
當輸入一定壓力的高濃度二氧化碳氣體，通過調節閥、針閥及電磁閥的流量、時間控制，保證一定量的二氧化碳氣體進入工作室，達到自動控制工作室內的二氧化碳濃度值。該值同時通過顯示電路顯示，便于觀察了解。為方便用戶在使用中進行濃度的監視和采樣，在二氧化碳細胞培養箱的后背面裝有采樣、監視口。因采用了快慢速雙重充氣法，使二氧化碳培養箱在開、關門后，工作室內的二氧化碳濃度能快速恢復且無過沖現象。
在二氧化碳細胞培養箱工作過程中，由儲氣瓶對工作室內進行補氣，二氧化碳記錄儀記錄數值，以保持穩定的二氧化碳濃度值。
CO2培養箱主要控制模擬活體內環境相關的3個基本變量：穩定的CO2水平、溫度、相對濕度。要有穩定的培養環境，就要考慮這三方面的影響因素，選購時，就應該對這些“重中之重"有一定的了解才能選到適合自己的儀器。但是，其它的一些方面的“小"因素也不能忽略，因為這些都會影響儀器的使用價值和壽命。選購時，就應該從各方面的因素加以考慮。
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