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蛋白酶k在DNA提取中的作用

時間:2022/11/15閱讀:1469
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蛋白酶k是一種枯草蛋白酶類的高活性蛋白酶,用于生物樣品中蛋白質的一般降解。從林伯氏白色念球菌(tritirachiumalbumlimber)中純化得到。蛋白酶k,是一種切割活性較廣的絲氨酸蛋白酶。它切割脂族氨基酸和芳香族氨基酸的羧基端肽鍵。此酶經純化去除了RNA酶和DNA酶活性。由于蛋白酶k在尿素和SDS中穩定,還具有降解天然蛋白質的能力,因而它應用很廣泛,包括制備脈沖電泳的染色體DNA,蛋白質印跡以及去除DNARNA制備中的核酸酶。蛋白酶k的一般工作濃度是50—100μg/ml。在較廣的pH范圍內(pH4-12.5)均有活性。值得注意的是,蛋白酶k在原位雜交技術中通常用于雜交前的處理,它具有消化包圍靶DNA蛋白質的作用,以增加探針與靶核酸結合的機會,提高雜交信號.但蛋白酶k的濃度過高、消化時間過長或孵育溫度過高時,都會對細胞的結構有一定的破壞,導致組織切片的脫落,細胞核的消失,從而影響雜交結果.EDTA緩沖液可以替代蛋白酶k的作用,解決上述出現的問題,并能達到理想的染色效果

 

在生物相關的領域當中,經常需要對DNA進行提取分析,這樣就可以快速有效地判斷生物種類,還可以更深入地對基因組成進行研究,而這類研究當中非常關鍵的一步就是從細胞當中提取出DNA。要知道DNA處在細胞核當中,如果采取簡單粗暴的手段來破壞細胞結構,也會同時破壞了更加脆弱的DNA結構,導致研究無法繼續進行下去。而有了蛋白酶k的幫助,就能有效分解細胞當中的所有蛋白質,從而把細胞核里面的DNA釋放出來,而且結構不會受影響。提取出來的DNA不但能夠保持完整性,而且還保持了生命的活性,能夠通過簡單的方式進行增殖。

 

那么如何才能更好的保存蛋白酶k呢?

只要將蛋白酶k保存在-20℃冰箱里,避免反復凍融,就能有效保證12月。而使用時也要注意,孵育溫度為55至65℃,理想孵育溫度為58℃,孵育時間為15分鐘至48小時;理想孵育時間為2小時。

 

以上為大家介紹的就是蛋白酶kDNA提取中的作用,有了這種技術,也就可以更方便更準確地進行生物基因領域的研究目前這種技術也進入到了實際的生產當中,在遺傳育種以及疾病治療當中都發揮了重要的用途。

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