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ELISA試劑盒基礎知識培訓

時間:2014-7-11閱讀:974
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大家在做ELISA試劑盒實驗的過程中,難免會遇到各種不同的問題,比如標準曲線不好,試劑盒的回收率,假陰性,假陽性,實驗的重復性不好等等。現(xiàn)在專業(yè)人士就來一一解答用戶們在實驗過程中遇到的各種疑問!
曲線問題: 
1.OD值不正常
試劑盒未回溫,試劑盒回溫到25℃
溫度控制不好,控制正確溫度
孵育時間不準確,控制孵育時間
洗滌時沖擊力太大、浸泡時間過長、洗滌次數(shù)增 加,洗滌4-5次,每孔250ul,然后拍干
陽光直射,對著風直接吹,避風避
酶標儀的波長錯誤,酶標儀的波長450nm
抗體的稀釋錯誤,正確的稀釋抗體
水質問題,用娃哈哈礦泉水代替
2.白   板
洗滌液配制錯誤,正確的配制洗滌液
少加液體(錯加液體),正確的步驟加液體
3.無 梯 度
標準品也污染,換標準品點板
OD值不正常,控制溫度時間在做一次
人為點板,不要點板
4.線 性 不 好
OD值不正常,控制溫度時間在做一次
回收率
1.空白管陽性高
樣本本身就是陽性樣本,換陰性樣本做回收率
空白管在實驗中被污染,實驗中防止交叉污染
水質原因用,娃哈哈礦泉水代替
2.偏  高
添加量不準確,的添加量
添加濃度不適合,添加合適的濃度
取液吹干量多,準確的取液吹干
取到其它相層液體,取需用相吹干
復溶液未稀釋或加入量少,正確的稀釋復溶液
3.偏  低
添加量不準確,的添加量
添加濃度不適合,添加合適的濃度
取液吹干量少,準確的取液吹干
復溶液稀釋錯誤或加入量多,正確的稀釋復溶液
假陰、陽性
1,水質原因:點復溶液驗證,用娃哈哈礦泉水代替
2,實驗操作原因
吸取到其它相吹干,準確的取液吹干
離心不*,延長離心時間
樣本的污染,更換樣本
乳化未處理*,溫浴(70℃)處理乳化現(xiàn)象
3,儀器試劑原因
離心管未清洗干凈,正確的洗滌器具
有機溶劑的影響,做試劑空白看影響結果
4,衍生化試劑原因(長時間衍生化試劑變質),更換衍生化試劑
5,與曲線好壞相關,,保證曲線的正常。

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