ELISA試劑盒試驗3個陰性對照A值均應≥0.5×NCX，并≤1.5×NCX，如其中之一超出此計劃，則棄去，算了另兩個陰性對照從頭核算NCX；
如有兩個陰性對照A值超出以上計劃，則該次試驗無效。
在條件許可下，應該用比色計測定吸光值，這么能夠得到客觀的數據。
現舉某種檢查 HBsAg的試劑盒為例。
先讀出標本（sample，S）、陽性對照（P）、和陰性對照（N）的吸光值，然后進行核算。
核算方法有多種，大致可分為陽性斷定值法和標本與陰性對照比值法兩類。
陽性對照品HBsAg的含量標明為P=9±2ng /ml。每次試驗設2個陽性對照和3個陰性對照。
ELISA試劑盒陽性斷定值公式中的常數是在這特定的系統中通過對許多標本的試驗檢查而得到的。ELISA試劑盒陽性斷定值（cut-off value）一般為陰性對照A值加上一個特定的常數，以此作為區別作用陽性或陰性的規范。
用此法區別作用央求試驗條件非常穩定，試劑的制備有必要規范化，陽性和陰性的對照品應符合一定的規范，須配用精密的儀器，并嚴重按規則操作。
ELISA試劑盒中的陰性對照品為不含HBsAg的復鈣人血漿，目視法簡捷明晰，但頗具主觀性。
測得A值后，先核算陰性對照A值的平均數（NC X ）和陽性對照A值的平均數（PCX），兩個平均數的差（P-N）有必要大于一個特定的數值（例0.400），試驗才有用。