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暗視野顯微鏡檢查法
暗視野顯微鏡又叫暗場顯微鏡，是一種通過觀察樣品受側(cè)向光照射時所產(chǎn)生的散射光來分辨樣品細(xì)節(jié)的特殊顯微鏡。
1、暗視野顯微鏡的原理和結(jié)構(gòu)特點(diǎn)
暗視野顯微鏡和一般的明視野顯微鏡區(qū)別在于二者的聚光器不同，暗視野顯微鏡裝有一個中央遮暗的聚光器，使光線不能通過聚光器，而只能從聚光器四周邊及未遮暗的部位斜射到載玻片的標(biāo)本上。因光線是斜射的，不能進(jìn)入物鏡，故觀察的視野是暗的，而聚光器斜射到菌體上的光線，因光散射作用而使菌體發(fā)出亮光，反射到物鏡內(nèi)，這樣在顯微鏡中可見到暗視野中明亮的物像。
暗視野顯微鏡主要用于檢查未染色標(biāo)本的形態(tài)和運(yùn)動能力。
2、操作方法
①使用研究用暗視野顯微鏡，或?qū)⑵胀ü鈱W(xué)顯微鏡上的聚光器取下，換上暗場聚光器。
②不論是使用干燥物鏡還是油浸物鏡，鏡檢時都應(yīng)在聚光器的上透鏡上加一大滴香柏油。
③將制作好的細(xì)菌懸滴標(biāo)本片置于載物臺上，上升聚光器至頂部使油與載玻片接觸。
④放大光源 。
⑤進(jìn)行聚光器光軸調(diào)節(jié)及調(diào)焦。用10*物鏡找到被檢物像，關(guān)小聚光器虹彩光圈至可在視野中看到視場光闌的輪廓，再上下緩慢調(diào)整聚光器，這樣會使視場光闌的像變得清晰，如視場光闌不在場中央，利用聚光器外側(cè) 的兩個調(diào)節(jié)鈕進(jìn)行調(diào)整，當(dāng)亮光點(diǎn)調(diào)到場中央后，再將其開大，即可進(jìn)行觀察。
3、注意事項(xiàng)
①暗視野觀察所用物鏡的數(shù)值孔徑宜在1.00—1.25左右，太高反而效果不佳，是使用帶視場光闌的物鏡，轉(zhuǎn)動物鏡中部的調(diào)節(jié)環(huán)，可隨意改變數(shù)值孔徑的大小。
②要求使用的載玻片和蓋玻片必須無劃痕且無灰塵，物鏡前透鏡也必須清潔無塵。載玻片與蓋玻片的厚度應(yīng)符合標(biāo)準(zhǔn)。載玻片太厚，聚光器的焦點(diǎn)將落在載玻片內(nèi)，達(dá)不到被檢物體的平面上；使用油鏡頭時，由于物鏡的工作距離很短，甚至無法調(diào)焦，從而看不到或看不清被檢物體。
③鏡檢時室內(nèi)要暗，如果沒有這樣的條件，應(yīng)盡可能使用遮光裝置，以阻止目鏡周圍的光線射入。
④在進(jìn)行油鏡鏡檢時，由于油內(nèi)的雜質(zhì)和氣泡的漫反射，會妨礙視場的鏡檢效果，所以要求盡可能地除掉油內(nèi)的雜質(zhì)和氣泡。