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寡核苷酸類藥物檢測之尺寸排阻（SEC）色譜柱
閱讀：2307發布時間：2023-5-19
寡核苷酸類藥物檢測之尺寸排阻（SEC）色譜柱
隨著寡核苷酸藥物的研發步伐越來越快，對高純度寡核苷酸產品的需求也日趨旺盛。在今天的推送內容里，我們將介紹尺寸排阻色譜法在寡核苷酸藥物質量控制中的應用。
在寡核苷酸的分析中，尺寸排阻分離模式是基于堿基數量、磷酸基不同導致的分子量差別進行分離，通常用于簡單的質量控制或純度研究。該模式的優點是可以使用接近生理條件的洗脫溶液進行等度分離。有時也會添加水溶性有機溶劑來抑制疏水吸附。
分析不同堿基數目的寡核苷酸
下圖是采用兩根串聯的SEC色譜柱TSKgel UP-SW2000來區分長度相差一個堿基的寡核苷酸混合物 (20-mer和N-1 19-mer)。
TSKgel UP-SW2000是東曹生命科學最新開發的粒徑2μm、孔徑12.5nm的硅膠基質SEC色譜柱，主要用于分離分子量范圍為1-150kDa的小蛋白、肽和寡核苷酸等生物分子。該色譜柱兼容HPLC和UHPLC系統，因此也能夠從傳統的HPLC-SEC方法轉換到UHPLC。
下圖是使用TSKgel G2000SWXL色譜柱分離不同堿基數量的合成寡核苷酸混合物的譜圖。為了抑制核酸酶活性，有時會在流動相中添加EDTA等約1 mmol/L的螯合劑。
SEC法分離脂質體包被的siRNA
下圖是使用TSKgel SuperSW2000色譜柱對天然型DNA核酸藥物Defitelio進行質量分析的示例。
參考文獻：Handbook of analysis of oligonucleotides and related Products, Feb.23 (2011) 125, Edited by J.V. Bonilla et al.
寡核苷酸分析用SEC色譜柱
下表中列出了適用于核酸分離的SEC色譜柱。對于＜375 bp的短鏈核酸或寡核苷酸，UP-SW3000、UP-SW2000、G3000SWXL以及G2000SWXL這幾款色譜柱都是比較推薦的。
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