硫氧還蛋白過氧化物酶（TPX）測試盒

微量法100T/96S

注意：正式測定之前選擇2-3個預期差異大的樣本做預測定。

測定意義：

TPX屬于過氧化物酶家族，在體內主要通過還原過氧化氫和一些氫過氧化物來實現抗氧化作用，功能與GPX類似，也是谷胱甘肽氧化還原循環關鍵酶之一。TPX普遍存在于各種生物體內，如酵母、植物、動物、原生動物、寄生蟲、細菌和古細菌，在進化上高度保守。TPX與細胞增殖、分化、細胞凋亡及腫瘤發生調控密切相關。TPX的主要功能包括細胞脫毒、抗氧化和調節由過氧化氫介導的信號轉導和免疫反應。

測定原理：

TPX催化H2O2氧化二硫蘇糖醇（DTT），H2O2的吸收波長為240nm，通過測定240nm吸光度的下降速率，即可計算出TPX活性。

自備儀器和用品:

低溫離心機、水浴鍋、可調節移液器、紫外分光光度計/酶標儀、微量石英比色皿/96孔板（UV板）、和蒸餾水

試劑組成和配制:

試劑一：液體120mL×1瓶，室溫保存。

試劑二：液體20mL×1瓶，- 20℃保存。

試劑三：液體2mL×1支，4℃。

粗酶液提?。?/p>

組織：按照組織質量（g）：試劑一體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL試劑一）進行冰浴勻漿。8000g，4℃離心10min，取上清置冰上待測。

細菌、真菌：按照細胞數量（104個）：試劑一體積（mL）為500~1000：1的比例（建議500萬細胞加入1mL試劑一），冰浴超聲波破碎細胞（功率300w，超聲3秒，間隔7秒，總時間3min）；然后8000g，4℃，離心10min，取上清置于冰上待測。

血清等液體：直接測定。

TPX測定操作：

取微量石英比色皿或96孔板，加入4 μL上清液，180 μL試劑二，16 μL試劑三，迅速混勻后于240 nm測定10s和130s吸光度，記為A1和A2。

TPX活性計算公式：

a.使用微量石英比色皿測定的計算公式如下

(1). 按蛋白濃度計算

活性單位定義：25℃或者37℃中，每毫克蛋白每分鐘催化1nmol H2O2降解為1個酶活單位。

TPX（nmol/min /mg prot）=(A1－A2)÷ε÷d×V反總÷（Cpr×V樣）÷T

=573×(A1－A2)÷Cpr

(2). 按樣本質量計算

活性單位定義：25℃或者37℃中，每克樣本每分鐘催化1nmol H2O2降解為1個酶活單位。

TPX活性（nmol/min/g 鮮重）=(A1－A2)÷ε÷d×V反總÷(W×V樣÷V樣總)÷T

=573×(A1－A2)÷W

（3）按細胞數量計算

活性單位定義：25℃或者37℃中，每104個細胞每分鐘催化1nmol H2O2降解為1個酶活單位。

TPX活性（nmol/min/104 cell）=(A1－A2)÷ε÷d×V反總÷(細胞數量×V樣÷V樣總)÷T

=573×(A1－A2)÷細胞數量

（4）按液體體積計算

活性單位定義：25℃或者37℃中，每毫升液體每分鐘催化1nmol H2O2降解為1個酶活單位。

TPX活性（nmol/min /mL）=(A1－A2)÷ε÷d×V反總÷V樣÷T

=573×(A1－A2)

ε：H2O2的摩爾消光系數，43600 L/mol/cm=0.0436 L/μmol/cm；d：比色皿光徑，1cm；V反總：反應體系總體積（L），200 μ L=2×10-4 L；Cpr：上清液蛋白質濃度（mg/mL）；W ：樣品質量；V樣：加入反應體系中上清液體積（mL），4 μL=4×10-3 mL；V樣總：提取液體積，1 mL；T：反應時間（min），2min。

b.使用96孔板測定的計算公式如下

(1). 按蛋白濃度計算

活性單位定義：25℃或者37℃中，每毫克蛋白每分鐘催化1nmol H2O2降解為1個酶活單位。

TPX活性（nmol/min /mg prot）=(A1－A2)÷ε÷d×V反總÷（Cpr×V樣）÷T

=1146×(A1－A2)÷Cpr

(2). 按樣本質量計算

活性單位定義：25℃或者37℃中，每克樣本每分鐘催化1nmol H2O2降解為1個酶活單位。

TPX活性（nmol/min/g 鮮重）=(A1－A2)÷ε÷d×V反總÷(W×V樣÷V樣總)÷T

=1146×(A1－A2)÷W

（3）按細胞數量計算

活性單位定義：25℃或者37℃中，每104個細胞每分鐘催化1nmol H2O2降解為1個酶活單位。

TPX活性（nmol/min/104 cell）=(A1－A2)÷ε÷d×V反總÷(細胞數量×V樣÷V樣總)÷T

=1146×(A1－A2)÷細胞數量

（4）按液體體積計算

活性單位定義：25℃或者37℃中，每毫升液體每分鐘催化1nmol H2O2降解為1個酶活單位。

TPX活性（nmol/min /mL）=(A1－A2)÷ε÷d×V反總÷V樣÷T

=1146×(A1－A2)

ε：H2O2的摩爾消光系數，43600 L/mol/cm=0.0436 L/μmol/cm；d：96孔板光徑，0.5cm；V反總：反應體系總體積（L），200 μL=2×10-4 L；Cpr：上清液蛋白質濃度（mg/mL）；W ：樣品質量；V樣：加入反應體系中上清液體積（mL），4 μ L=4×10-3 mL；V樣總：提取液體積，1 mL；T：反應時間（min），2min。

上海牧榮生物科技有限公司

1. 國內試劑耗材經銷代理。

2. 國外試劑的訂購?？商峁W美實驗室品牌的采購方案。

3. 提供加急物流處理，進口貨物，最快交期1-2周。

4. 進出口貨物代理服務。

5. 公司代理眾多有名生命科學領域的研究試劑、儀器和實驗室消耗品品牌：CELL DATA,Alamanda Polymers， cstti，Click Chemistry tools，Nanoprobes，Ancell，NANOCS，Ambeed, Inc，SPEED BioSystems, LLC，Tulip Biolabs, Inc，Torrey Pines Biolabs，magsphere ,FabGennix International ,paratechs，Medicago,Oraflow,CWE,Wasatch Photonics, alphananote, It4ip, proteoform, Caprico等,重點合作品牌 Lee Biosolutions,chematech,Nanopartz,denovix,Atto tec,macrocyclics等。

6. 質量保證，所有產品都提供售后服務。付款方式靈活。公司堅持“一站式”服務模式，為客戶全面解決實驗、生產、開發需求。公司整合國際與國內資源，加強網絡建設，提高公司內部運作效率，為客戶提供方便、快捷的服務。

7. 公司突出創新思維，提高工作效能，減低運作成本，為客戶提供優惠的價格。

硫氧還蛋白過氧化物酶（TPX）測試盒