支原體染色檢測試劑盒

產(chǎn)品貨號：R23155

產(chǎn)品規(guī)格：100ml

產(chǎn)品簡介： 支原體染色檢測試劑盒(Mycoplasma Stain Assay Kit)是一種經(jīng)典的利用DNA熒光染色法檢測支原體污染的試 劑盒，其原理是當細胞發(fā)生凋亡時，染色質會固縮， Hoechst染色后在熒光顯微鏡下觀察，正常細胞的細胞核呈 正常的藍色，而凋亡細胞的細胞核會呈致密濃染，或呈碎塊狀致密濃染，顏色有些發(fā)白。 尚寶生物 Hoechst Staining Kit經(jīng)常用于培養(yǎng)的貼壁或懸浮細胞以及組織切片的細胞凋亡檢測。該試劑盒檢測 細胞含量范圍一般為0.1～1×10 6之間。

產(chǎn)品組成： 自備材料： 1. 可觀察藍光的熒光顯微鏡或激光共聚焦顯微鏡 2. PBS或生理鹽水 3. 載玻片、蓋玻片 4. 預冷固定液：預冷的70%乙醇或4%多聚甲醛 操作步驟(僅供參考)： (一)貼壁細胞 1. 取潔凈蓋玻片在70%乙醇中浸泡5分鐘或更長時間，無菌超凈臺內吹干或用無菌的PBS或生理鹽水洗滌3次， 再用細胞培養(yǎng)液洗滌1次。將蓋玻片置于6孔板或其他培養(yǎng)皿內，接種細胞培養(yǎng)過夜，使融合率約為50%～ 80%。 2. 加入干預條件使細胞發(fā)生凋亡后，吸盡培養(yǎng)液，加入Hoechst固定液0.5ml，固定10分鐘或更長時間(可4℃過 夜)。 3. 去除固定液，用PBS或生理鹽水洗2次，每次3min，吸盡液體。洗滌時宜用搖床，或手動晃動。 4. 加入Hoechst染色液0.5ml，孵育5min。也宜用搖床，或手動晃動數(shù)次。 5. 棄染色液，PBS或生理鹽水洗2次，每次3min，吸盡液體。洗滌時宜用搖床，或手動晃動。 6. 滴一滴抗熒封片劑于載玻片上，蓋上貼有細胞的蓋玻片，讓細胞接觸封片劑，避免氣泡。 7. 熒光顯微鏡可檢測到呈藍色的細胞核。激發(fā)波長350nm左右，發(fā)射波長460nm左右。 (二)懸浮細胞 1. 離心收集細胞樣品于1.5ml離心管內并棄液，加入Hoechst固定液0.5ml，緩緩懸起細胞，固定10min或更長時 間(亦可4℃過夜)。 2. 低速離心去除固定液，用PBS或生理鹽水洗2次，每次3min。洗滌時手動晃動數(shù)次。